三株优良藻株的分离鉴定、培养条件改造及PEPC酶的初步研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

内 内蒙古科技大学硕士学位论文 I I 摘 要 微藻是能够利用光能进行光合作用的微生物，它能吸收 CO2 合成自身生长所需 要的物质，普遍具有生长周期短、易培养、生物量高等特点，而且许多微藻含油量 高、还富含虾青素等次级代谢产物。所以在能源领域，微藻生物柴油被视为可替代 化石燃料的新能源；在医疗保健领域，从藻细胞内提取多不饱和脂肪酸及高附加值 色素等已成为开发热点。因而，微藻产业被世界广泛关注、研究。 本文通过对内蒙古乌梁素海淡水水体及天津塘沽东疆港海水水体进行大量筛 选，获得三株优势藻株，并对其进行评价、培养条件改造以及分子生物学鉴定，并 对微拟球藻油脂代谢过程中关键酶 PEPC 进行初步研究，主要研究结果如下： 1、成功筛选得到三株优势藻株 XJ307、XJ308、XJ309，其生物量分别为细胞干 重 1.2g/L、0.86g/L、0.48g/L，含油量分别为 50.3%、34.6%和 40.5%。XJ307 藻株为 淡水藻株，含高附加值多不饱和脂肪酸 AA 和 EPA，含量分别占总油脂的 0.52%和 5.12%，XJ308 为产虾青素海水藻株，虾青素含量为 0.43%细胞干重，XJ309 为海水 藻株，脂肪酸成分主要以 C16 和 C18 系为主，极少含长链脂肪酸组分。三株藻种性 状均适合作为制备生物柴油原料。 2、通过光学显微镜及电镜观察形态，XJ307 为单细胞微藻，中部膨大，末端较 尖，两个色素体对称分布；XJ308、XJ309 以单细胞形式存在，为球形藻，细胞为绿 色，无鞭毛；其中 XJ308 在前期培养藻细胞为绿色，在后期受胁迫后藻细胞逐渐变 红，叶绿体片层明显。利用 18S rDNA 在进化上的保守性，对 XJ307、XJ308 和 XJ309 进行 18S rDNA 序列扩增，通过测序后构建进化树分析，命名 XJ307 为菱形藻 属，Nitzschia sp. XJ307；XJ308 为栅藻属，Scenedesmus sp. XJ308；XJ309 为绿藻 属，Chlorococcum sp. XJ309。 3、柱式培养条件下，以 f/2 培养基为基础，对 XJ308、XJ309 进行氮源浓度改 造。NaNO3 浓度为 0.6g/L 时，藻株 XJ308 可实现资源开发最大化，油脂产率为 100.27mg/L/day，虾青素产量为 19.61mg/L。NaNO3 浓度为 0.1g/L 时，XJ309 油脂产 率最大达 22.74mg/L/day。开放式培养 150L 跑道池培养条件下，f/2 作培养基，XJ309 生物量低。改造 NaNO3 初始浓度为 750mg/L 的海水 BG11 作为培养基，XJ309 生物 量最高达到 2g/L ， 油 脂 含 量 经 积 累 可 达 25.43% ，产率可达到 干重达到 II II g/m2/day。并构建了基于开放式跑道池光照强度、温度及 NaNO3 消耗与微藻生 长之间的数学模型，在一定程度上揭示了微藻生长与光照强度、温度及 NaNO3 消耗 之间的内在关系。 4、利用尼罗红快速检测油脂含量，在不同 NaNO3 浓度条件下测得油脂含量明显 差异时，提取测定 PEPC 酶活。微拟球藻在 NaNO3 浓度 30mg/L 时，油脂含量为 1306.9mg/L，PEPC 酶活为 13.73U/mL；75mg/L 条件下油脂含量为 1182.0mg/L， PEPC 酶活为 14.91U/ml，高浓度 150mg/L 时，油脂含量为 540mg/L，PEPC 酶活为 29.77U/ml。PEPC 酶活高，减少了 C 源流向油脂合成，而导致油脂含量下降。 通过对筛选获得的三株优势藻株的研究评价，可为微藻规模化生产生物柴油、 提取多不饱和脂肪酸(PUFAs)和高附加值色素等薇藻综合化产业应用奠定基础。 关键词：富油微藻；分子鉴定；脂肪酸成分；虾青素；开放式培养；PEPC 酶活 内蒙 内蒙古科技大学硕士学位论文 PAGE PAGE IV Abstract Microalgae absorb carbon dioxide in the air mainly by using solar energy to generate substances for the growth of itself. With the advantages of easy to cultivate, fast growth, high biomass production and rich in lipids and astaxanthin, microalgae are important resources of bio-energy and high-value co-products