三株致病性李斯特菌的蛋白质组学研究-遗传学专业论文.docxVIP

张晨菊三株致病性李斯特菌的蛋白质组学研究三株致病性李斯特菌的蛋白质组学研究 张晨菊三株致病性李斯特菌的蛋白质组学研究 三株致病性李斯特菌的蛋白质组学研究 研究生：张晨菊 导师：焦新安教授 中文摘要 李斯特菌是一类重要的食源性病原微生物，可引起人类和动物的败血症、流产、脑膜 炎和胃肠炎等临床症状，死亡率可达30％。老人、儿童和免疫力低下人群最易感。李斯 特菌属有六个菌种，其中只有产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes，简称LM)和伊 万诺夫李斯特菌(Listeria ivanovii，简称LI)具有致病性。LM是引起人类李斯特菌病的主 要病原，在其13个血清型中，90％以上的人李斯特菌病由1／2a、1／2b和4b血清型引起。 LI极少引发人类疾病，有少数动物感染病例报道。本研究分别提取三株致病性李斯特菌 (1／2a型产单核细胞李斯特菌LM4、4b型产单核细胞李斯特菌F4636及一株L．wanovi0的 菌体蛋白和分泌蛋白进行了比较蛋白质组学分析，并将二维电泳技术与免疫印迹技术结合 对三株李斯特菌的菌体蛋白进行了免疫蛋白质组学分析。 在菌体蛋白比较蛋白质组学分析中，应用固相pH梯度二维凝胶电泳获得了重复性较 好的2-DE凝胶图谱，利用PDQuest软件筛选出差异蛋白质，切点进行质谱分析，用 MALDI-TOF／TOF．MS获得肽质量指纹图谱，MASCOT数据库进行搜索，获得所鉴定蛋 白质的生物学信息。通过质谱鉴定，得到的20个差异蛋白，功能涉及糖代谢、能量代谢、 细胞周期控制以及宿主侵袭、分子伴侣等众多事件，为了解致病性李斯特菌的种问差异和 遗传进化奠定了基础。 本研究应用免疫蛋白质组学方法检测三株李斯特菌菌体蛋白，发现12个具免疫原性蛋 白，其中乙酰乳酸合成酶和FeS组装蛋白Su仍首次发现具免疫原性，其它蛋白在多种病 原微生物中也检测到免疫原性，为了解李斯特菌的致病机理，发现新型毒力因子，开发有 效的李斯特菌疫苗提供一定的理论基础。 采用TCA沉淀法分别提取三株李斯特菌分泌蛋白，进行比较蛋白质组学分析，初步 了解LM与LI在蛋白质水平上的差异，质谱成功鉴定18个蛋白质，主要为李斯特菌毒力 相关蛋白、细胞壁溶解素、物质代谢、能量代谢、分子伴侣等相关蛋白。发现上清中出现 没有预测的信号序列的蛋白质，提示李斯特菌中可能存在未知的蛋白质分泌途径。本研究 发现了一些潜在的李斯特菌毒力因子，为LM与LI的致病性差异研究提供了新的方向。 关键词：李斯特茵，二维电泳，蛋白质组学，免疫蛋白质组学，质谱分析 扬州大学硕士学位论文Proteomic 扬州大学硕士学位论文 Proteomic Analysis of Three Strains of Listeria spp．with Pathogenicity M．S．candidate：Chenju Zhang Advisor．Prof．Xin’锄Ji8．0 Abstract Listeria monocytogenes is an important food-borne pathogen that carl cause septicaemia, encephalitis，meningitis and gastroenteritis in humans and animals．The mortality of Listeriosis can reach 30％．The elderly,children and immunocompromised people are most susceptible．Listeria genus has six species,of which only Listeria monocytogenes(referred to as LM)and Listeria ivanovii(referred to as LI)are pathogenic．LM is the caUSe of human listeriosis，with 1 3 serotypes,90％ofthe human listeriosis were caused by the 1／2a,1／2b and 4b serotypes of LM．LI rarely cause human disease,there are few reported CaSeS of animal infection．In this study,comparative proteomic analyses were conducted using the extracted proteins of bacterial cells and the culture supernatants