利用重组大肠杆菌生产2,3--二磷酸甘油酸的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究中文摘要 利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究 中文摘要 2，3-二磷酸甘油酸(2，3．BPG,2,3一Bisphosphoglycerate)是生命体内糖酵解途径的中 间产物l，3二磷酸甘油酸(1，3．BPG,1，3．Bisphosphoglycerate)的同分异构体，由仅存在于 血红细胞和胎盘中的酶一一二磷酸甘油酸变位酶(BPGM，Bisphosphoglycerate mutase， 113称DPGM，diphosphoglycerate mutase)催化1，3．BPG生成。最早于1 925年被发现的 2，3．BPG直到上世纪60年代其功能才由Benesch等人阐明。因为2，3．BPG是血红蛋白 的别构调节物，与血红蛋白等摩尔结合，因此是调节02和血红蛋白亲和力的重要因素。 当血液流经组织时，高含量的2，3．BPG的存在能显著增加02的释放并供组织需要。 因此，2，3．BPG在预防和治疗高原反应，提高运动员身体机能等方面有着极大的应用 价值。鉴于目前尚无人工合成2，3．BPG的报道，也无合适方法从血液中富集回收，我 们考虑运用基因工程的方法来进行2，3．BPG的生产。因为大肠杆菌中不存在BPGM， 也不存在2，3．BPG。因此我们将表达BPGM的质粒pET30c．BPGM转入大肠杆菌并以 IPTG进行诱导，通过向培养基中加入葡萄糖，利用大肠杆菌的糖酵解途径来生产 2，3．BPG。资料显示BPGM在Cl。的存在下主要发挥磷酸酶活性将2，3．BPG分解为 3-PGA和无机磷，通过孔雀石绿法定磷法检测无机磷在630nm的吸光度，根据无机磷 标准曲线得到发酵产品中2，3．BPG的含量。 在培养条件上，我们摸索到合适的葡萄糖浓度为109／L，合适的诱导时间为4 h，并发 现在诱导时加入终浓度0．5％的Tween 80可以促进2，3．BPG穿过大肠杆菌细胞壁分泌 入培养基。为接下来的回收纯化工作打下了良好的基础。 关键词：2,3．二磷酸甘油酸；二磷酸甘油酸变位酶；葡萄糖： 利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究Abstract 利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究 Abstract 2,3-BPG(2，3一Bisphosphoglycerate)is an isomer ofthe 1,3一BPG(1，3-Bisphosphoglycerate) which acts as an intermediate in the glycolysis pathway．It Call be catalyze by the exclusive enzyme—BPGM(Bisphosphoglycerate Mutase，old name Diphosphoglycerate Mutase．DPGM)that merely exists in erythrocyte and placenta．2,3一BPG was first found in 1 925，but not until 1 965 had its function to be cleared by Benesch．Cause 2,3一BPG acts as all allosteric model and combines with the hemoglobin equally in amount．Thus it plays a critical role in adjusting the affinity between 02 and hemoglobin．When blood flows pass tissues，the existence of high amount of 2，3-BPG would extraordinarily increase the release of 02 from hemoglobin to tissues which make 2,3-BPG becomes a star molecular in preventing and curing the high altitude syndrome，improving the body function of atheletes． However，nowadays there’S no records on synthesize of 2，3-BPG and clearly not a considerable choice to restore from blood．In the paperwe establish a recombinant E．coli express system to produ