冷冻电镜技术与冷冻电镜图象去噪研究-生物物理学专业毕业论文.docxVIP

撼要冷冻电镜技术与冷冻电镜图象去噪研究 撼要 冷冻电镜技术与冷冻电镜图象去噪研究 专 业： 生物物理学 姓 名： 李鲲鹏 导 师： 张景强教授 摘要 冷冻电镜技术是2l世纪结构生物学研究中最具活力的主流实验技本之 ，姥亢对象 囊括了从纳米量级的蛋白质到微米量级的大分子复合物或超分子复合物，具有接近原子 分辨率的三维结构解析能力。研究并掌握冷冻电镜实验技爪具有非常重要的意义。本文 结合自身的实验条件，在对JEMl00CXI]型透射电镜进行了防污染装置和低剂量检测装置 改装的基础上，进行了冷冻电镜技术研究，研究对象为病毒单颗粒样品。针对南方实验 窒豹环境特点，本文着重对冷冻制样过程和低剂量成像过程中的冰晶污染f“』题进行了研 究，改装了冷冻制样设备，改进了冷冻制样流程，根据本实验室冷冻电镜f}f]等专点没订了 独具特色的拍照模式，掌握了冷冻电镜技术的要点和第一手的实验数据，{{}{累了一定的 经验。不仅实现了“拍出来”的目标，还达到了“拍的好”的技术要求。在此基础上， 对BmCPV／MAb复合物颗粒和BmCPV颗粒进行了比较研究，得到了BmCPV／MAb复合 物颗粒好于2．7rim分辨率的三维重构结果，从而验证了结合自身条件建立起来的冷冻电 镀实验设备、方法_和技术流程的正确性和可靠性。在此基础上，本文一方面研究了冷冻 电镜的信嗓特点，建立了更符会其成像啄理的信嗓模型，分析并评价了几种典型滤波 器在图像去噪和滤波方面的去噪特点和去噪效果，结合冷冻电镜图像的信噪特点改进 了MDL-CWT滤波器设计：另一方面研究了滤波去噪对单颗粒三维重构研究中单颗粒取 向估计的影响，并对登革病毒颗粒进行单颗粒三维重构研究，挑选了约200颗登革病毒成 熟颗粒，使用双边滤波器改善取向估计质量，建立了稳定的模板，得到了好于2 7nm的三 维重捣分辨率。发现了代表其表面衣壳蛋自掏象变化的结构学特征。 关键词：冷冻电镜技术、单颗粒三维重构、BmCP、，／MAb复合物、信噪比、滤波 器、去噪、登革病毒、构象变化 】s28@ZSU．edu．cn 第】页，共113页 冷冻电镜技术研究 英文摘要Research 英文摘要 Research of the Cryo—EM Technology and Denoising Research of the Cryo-EM Images Major： Biophysics Name： 垦!坚!竺旦!竖 Supervisor： !!!!：圣垒!坚!!呈gQ!!竖 Abstract Cryo—electron microscopy(Cryo—EM)is the most active and primar3’experimental tech- nology in structural biology．Its maltay research subjects are the aqueous macromolecular and macromolecular cornplexes．Cryo-EM technology not only has the near atomic res— olution power to resolve the structure of 2D crystal protein and single particles such“ tubulin、membrane proteins、ribosome mxd icosahedral virus，but also has the flexibility to research the conformatiorml change and interaction of the proteins in supramoleeular complexes such as virus and antibody complex、molecular motors and the cytoskeleton． Therefore，study on Cryo-EM technology is of great significance． In this paper．the study On Cryo-EM technology based on a refitted．，EMl00CXII TEM with anti—contaminant device and l_ow-dose indicator will be presented．Because of the humidity in Southern China，the relative humidity cannot be controlled very well，SO a big handicap is the ice c