昆虫滞育激素—性信息素合成激活肽基因的结构特性、发育表达、功能的分析及其转录调控机理的研究-遗传学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 鳞翅耳撼虫DH—PBAN cDNA编鼹滞育激素(DH)、性信息豢合成激滋肽 (PBAN)鞠冀矫三个章孽l经魏，这五个神经菰都蠢必闲静FXPR／KL诺=Gt s) 酰胺化的C末端。DH-PBAN基因主骚在咽下神缀节(SG)表达。DH在家黉 (Bombyx mori)中被j正明具有诱导卵滞育的功能，PBAN则在鳞翅目昆虫中起 到促进毽露感素宫残豹黪蠲。DH-PBAN麓嚣存在予尼秘蛹洚窍瓣躺怒基琵受巾， 但除PBAN能促进性信感素合成的功能夕}，其他神经肽功能还米知。我们试豳 研究DH．PBAN基因在棉铃虫(Helicoverpa armigera)蛹滞育中躺功能，为此酋 先克隆了桶铃虫DH．PBAN cDNA，它编码194个缀基酸前体默，根据保守的磺 鑫承解位熹，经酶韬鑫W褥臻33令鬣麓酸静PBAN，24个氨蘩羧戆DH窝努给 三个FXPRL神经肽。同源比较发现棉铃虫DH．PBAN编码的神缀肽与其他醋知 鳞翅目DH．PBAN编码的神经肽有高鹰同源性。岛窳蚕诱导滞育的功能不同，注 楚DH蒡不戆诱导携铃致蛹漳鸯。Northern blol窝半定量RT-PCR分辑豹结暴焱 明非浠育棉铃虫蛹SG的DH．PBANmRNA含量显蕊离子滞育蛹。粮据这一现簸， 给滞育棉铃虫注射DH，提高其体内DH含量，可肖效地打破棉铃虫的蛹滞肖。 这说明DH．PBAN基因的高表达可以缎进撼铃虫的蛹发育，面低淡达可以使别它 进入洚育。避一步发现DH鳞陈蛹滞蠢豹功髓是滋淡依赣豹。侮内帮俸静斡蜜验 证明DH能刺激前胸腺产生蜕皮激素，说明DH可能是通过提高体内的蜕皮激素 量达到解除滞育的功能。 缢DH．PBAN cDNA为搽铮，戆逡缓铃蛊基嚣缀文疼，褥到～个氡会穗铃斑 DH．PBAN潦因全长的4970 bp的基因序列。这个纂因编码25个氨基酸的DH， 把这个基因命名为DH25．DH25的基因结构与已知的家蚕DH—PBAN基因结构相 似，都会商六个辨显子鄹五个内含子。它的转录起始位点位于翻译起始位点的上 游29 bp。Southernblot鹣结采表裙，DH25在稿铃焱SUS2晶系中是荦拷贝。同 时在另外一个棉铃虫品系中克隆得到了含24个氨熬酸DH的DH—PBAN基因， 命名为DH24．DH25和DH24的外显予除了少数位点外，是高度同源的的，假在 内食子粒蘩魏零整，弱源装龆擐{磊。纛弱一个貔秘中发瑗嚣令蓑器较太豹嗣滚蕊 因，说明DH．PBAN基因速度进化较快。 DH．PBAN基因的淡达具有高度的时空特异性，为此试图研究DH．PBAN基 因的转录调节枧理。首先，我们发现了有两个蛋白髓结合到DH—PBAN的近躐离 启动子上，分剃命名凳DHMBP一1／．2。竞争经静凝蔽疆滞实验焱髑，DHMBP-1 具有与已知转录因子POU．M1相似的分子量和DNA结合特性。我们在青松×浩 月品系中毙隆得到的POU．M1类似序列与已报道的序列相比，肖核酸插入突炎， 造成嚣令爨蒸酸亭捌在筵108．136继萋宠全不弱，予是这令克羟棱翕名必 !鋈基黧楚查丕黧鎏耋逾塞。 !鋈基黧楚查丕黧鎏耋逾塞。 鼗煮!壅蒌瑟 。。 POU-M2。辩然POU-搬l釉POU．M2靠近N端静潜鳓有掰不搿，假它稻的POU domain序捌校露，裘达懿黉鑫也翼蠢粳麓敕DNA结会滤蛙。谴POU．Ml戏 POU-M2(POU-MIl-M2)程家蚕蠲瞧拣孛逡萋表遮，它稻貔辩裔程近距离藤动 子上丽增强浆蚕DH-PBAN扁动子活性。POU．M1／-M2的这种激滔俸用还做救予 继鸯在主游秘一鳖拳籁懿激活露予。粼DHMBP-1／-2涟爨家鼹幼敷敷清蛋魏的运 距凑爨动予上，遣靛毒效激瀑该痘臻予。这滋赘POU，M1／-M2巍家蘩璜{．薹}转矗N 萋嚣懿转黎满苓孛起溺麓要雩#薅。 窳蚕和棉铃虫DH．PBAN启劫予的比较发现，它们的冈源性臌然很低，但 TATAbox瓣POU-M1}-M2熟建台袋蕊熬黎穗辍。淡选懿POU-M2糍缝合爨糯铃 虫D}{．PBAN的POU-M1／一M2豹类似结合使点上，但结合力比岛窳蚕褶成彼点 瓣结岱要弱。在家爨缎熬枣抟惠穗子溪瞧势褥襄骥，犒铃交p联零嚣AN寝动予活 性要比家爨的商得多，饭姆窳蚕DH-PBAN扁动予不同，POU．M2举8}激活橘铃 建掰主lP转矗N塞豁子。熬豢餮D鞋潍{勉络台鼗赢每潼铃塞DH-PBAN襄旗子 的相应序列谶行替换，邋个煎组的扁幼子又能被POU-M2激活。遮说明家鬻和 楠铃塞DH-PBAN基嚣鹣转蒙诿苇壤壤毒嘏筏点鞠不鼷蠡。 窳蚕POU-M1／M2滋予POU Ill驻家羧。凝攒蠢翘懿磷究缀檠，POU Ill转 藤蠢予与翡携懿耱缀篾绕帮分泌爨嚣戆笈鹰塞键雅关。我销蹙终了攘铃焱黪 POU Ill转淤因子，命名为Har-POU。Har-POU的POU domain与其他POU