类A因子级联系统对井冈霉素合成的调控-微生物学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海交通大学博士学位论文答辩决议书  0090809047 姓名 谭高翼 学号 0090809047 所在 学科 微生物学 指导教师 钟建江 答辩 日期 2014-01-16 答辩 地点 交通大学，闵行校区，生命科学技术学院， 2号楼 116会议室 论文题目 类A 因子级联系统对井冈霉素合成的调控 投票表决结果: 7/7/7( 同意票数/实到委员数/应到委员数) 答辩结论:$通过 口未通过 评语和决议: 分子调控是微生物抗生素发酵研究的重要内容，是提高目标抗生素产量的有 效手段。该论文针对吸水链霉菌 5008 发酵制备井冈霉素，采用基因组、转录组、 基因敲除等技术，研究并揭示了 A 因子类似物 1，4-丁内酷提高井冈霉素产量的分 子调控机制，通过基因缺失等手段进行了工业菌株的分子改造，体现了具有产业 化应用的潜力 。选题具有重要的理论与应用价值，具有较高的创新性。实验设计 合理，结论可靠，研究系统深入。论文撰写规范，作者回答问题准确。以第一作 者在生物工程领域著名期刊 Biotechnology and Bioengineering 上发表了研究论文 。 总体上，该论文是一篇质量较高的博士论文。委员会全票c7票〉通过答辩，建 议授予博士学位。 20f 在 年 l 月的日 交EE3E 辩 委 贝=1 三-z:;;; 成 贝 签 名 职务 姓名 职称 单位 签名 主席 姜卫红 研究员 中科院上海分院，植生所 乡?飞 委员 钟建江 教授 上海交通大学 μ机( 委员 自林泉 教授 上海交通大学 6布坏 委员 {ì者炬 教授 华东理工大学 作机 b 委员 陈代杰 教授 上海医药工业研究院 饰 委员 洪枫 教授 东华大学 j业ú 委员 夏小霞 研究员 上海交通大学 丑小J在 秘书 于晴 未评职称(高校教师) 上海交通大学 _iil 上海交通 上海交通大学博士学位论文 类 A 因子级联系统对井冈霉素合成的调控 类 A 因子级联系统对井冈霉素合成的调控 摘要 放线菌是一类高 GC 含量的革兰氏阳性菌，目前已知抗生素中有 60%以上是由 放线菌合成。链霉菌是一类高等放线菌，具有强大的抗生素合成能力和复杂的形态分 化，故一直受到人们的关注。自上世纪六十年代，有关以 A 因子为代表的?-丁内酯类 自诱导信号分子在链霉菌次级代谢与分化中的作用及其机制，已有大量报道。但是， 在不同链霉菌中其调控作用和方式也不尽相同，尚存在不少需要深入研究的科学问 题。深入研究?-丁内酯调控系统对链霉菌工业菌株的次级代谢的调控作用及其机制， 将为如何利用代谢调控和代谢工程来提高抗生素的工业发酵水平提供重要的理论指 导。 井冈霉素，又称有效霉素，是一种由吸水链霉菌井冈亚种 5008(简称 5008)产生 的 C7N 氨基环醇类抗生素。由于井冈霉素能抑制真菌生长，可高效防治水稻纹枯病， 故被广泛用于我国和亚洲其他水稻产区。此外，井冈霉素及有效氧胺等其他井冈霉素 生物合成的中间产物都可用于生产治疗 II 型糖尿病的药物。鉴于井冈霉素的重要性， 本微生物代谢国家重点实验室邓子新院士团队在 2005 年鉴定完成了井冈霉素生物合 成基因簇，2012 年完成了 5008 的全基因组测序。本论文通过对基因组进行分析，在 其染色体上找到了 A 因子调控相关的同源基因，这暗示 5008 中可能存在类 A 因子 级联系统；有关类 A 因子级联系统对井冈霉素生物合成的调控则尚待研究。 本文首先利用天蓝色链霉菌 M145 作为指示菌检测到了 5008 发酵液中的?-丁内 酯信号分子。随后，将一种廉价的 A 因子结构类似物 1,4-丁内酯(1,4-BL)应用于井冈 霉素发酵，来考察其是否产生影响。5008 菌株的摇瓶发酵实验结果表明，在发酵 12 小时添加 10mM 的 1,4-BL 可提高井冈霉素的产量达 30%左右；转录分析结果表明， 添加 1,4-BL 能提高 adpA-H 等 A 因子级联调控相关同源基因和井冈霉素合成基因簇 的转录水平。在 5008 菌株的发酵罐实验中，添加 1,4-BL 也使井冈霉素产量提高约 30%；同样，在工业菌株 TL01(5008 的高产诱变菌株)的发酵实验中，添加 1,4-BL 也 I 显著促进了井冈霉素的合成。这些结果说明，添加 1,4-BL 是一种简单而且有效提高 井冈霉素发酵水平的策略。据此，我们推测 1,4-BL 能影响 5008 中的类 A 因子级联 系统，通过提高井冈霉素合成基因簇的转录水平进而提高抗生素的产量。 随后，本研究进一步考察了 1,4-BL 促进井冈霉素生物合成的作用机理以及类 A 因子级联系统对井冈霉素的调控作用。通过全基因组的分析，找到了三个可能的 ArpA 同源蛋白 ShbR1、ShbR2 和 Shb