雷公藤内酯醇对培养的大鼠肾上腺皮质细胞影响的实验研究-法医学专业论文.docxVIP

复旦大学硕士学位论文雷公藤内酯醇对培养的大鼠肾上腺皮质细胞 复旦大学硕士学位论文 雷公藤内酯醇对培养的大鼠肾上腺皮质细胞 影响的实验研究 中文摘要 雷公藤(纾动terygium wilfordii Hook，f)系卫矛科(Celastraceae)雷公藤属植物， 其化学成分复杂，具有抗炎、免疫调节、抗肿瘤、抗生殖等多种药理学活性。作为药物 最早收载于《神农本草经》。1974年，首次将雷公藤内服用于治疗类风湿性关节炎并取 得良好疗效。1981年，舒达夫等发现雷公藤醋酸乙酯提取物对类风湿性关节炎的近期疗 效显著，总有效率92．26％。雷公藤内酯醇，一种从雷公藤分离出来的环氧二萜类化合物， 是雷公藤发挥作用的主要物质成分之一，逐渐成为研究热点。 临床上，雷公藤与激素类药物泼尼松交替配合应用于治疗类风湿性关节炎、哮喘、 肾病综合征等，取得较好疗效。雷公藤见效虽然比激素慢，却持久稳定，且同时有抗炎、 免疫抑制及类皮质激素作用，却无强的松的副作用，丰富或补充了皮质激素治疗的不足， 两者阶段性交替用药是最佳的配伍。 临床研究显示雷公藤与神经内分泌系统有关联，我们在前期的实验动物整体水平 上，证实了雷公藤对下丘脑一垂体一肾上腺轴(hypothalamic pituitary adrenal axis，HPAA)具有促进作用。由于整体动物体内存在复杂的神经一内分泌一免疫调节网络 内环境，难以准确阐明雷公藤对HPM的确切作用环节及其抗炎和免疫调节作用机制。 随着雷公藤的应用，对于其作用机制的研究已有较多的报道。雷公藤对气道平滑 肌细胞、角膜成纤维细胞、神经星形胶质细胞均有作用，但其对离体大鼠肾上腺皮质 细胞的作用尚未见报道。在体内实验，我们发现雷公藤可以很明显的促进大鼠肾上腺 皮质酮的分泌和束状带细胞的增生。因此，本课题观察雷公藤内酯醇对体外培养的肾 上腺皮质细胞的影响作用，为阐明雷公藤促进内源性皮质激素分泌的机制，为指导临 床安全、合理、有效地使用雷公藤提供理论基础。 第一部分雷公藤内酯醇药物血清的制备及肾上腺皮质细胞的培养与鉴定 目的分离出大鼠肾上腺皮质细胞并进行原代培养。 方法采用药物血清的方法培养离体的大鼠肾上腺皮质细胞，并对培养细胞进行 组织化学鉴定。 结果 成功进行了大鼠。肾上腺皮质细胞的分离和培养，经鉴定后确认为肾上腺皮 质细胞。 第二部分雷公藤内酯醇对培养的肾上腺皮质细胞的形态学影响 第二部分雷公藤内酯醇对培养的肾上腺皮质细胞的形态学影响 目的研究雷公藤内酯醇对培养的肾上腺皮质细胞的形态学影响。 方法采用免疫组织化学法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达并计算PCNA阳性细胞数，透射电子显微镜观察肾上腺皮质细 胞的超微结构。 结果 中、高剂量雷公藤内酯醇组PCNA阳性细胞比率高于对照组(尺0．05)，泼 尼松组低于对照组(尺0．05)。电镜显示：对照组肾上腺皮质细胞胞浆线粒体肿胀，线 粒体嵴消失，光面内质网不多；泼尼松组线粒体肿胀，结构模糊，嵴消失，可见光面 内质网；而各剂量雷公藤内酯醇组线粒体丰富，不肿胀，嵴清楚，含丰富的光面内质 网。 第三部分雷公藤内酯醇对培养的肾上腺皮质细胞的功能学影响 目的研究雷公藤内酯醇对培养的肾上腺皮质细胞的功能学影响。 方法酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中皮质酮水平；实时荧光定量聚 合酶链式反应法检测肾上腺皮质细胞3 13一羟基类固醇脱氢酶(3 13一hydroxysteroid dehydrogenase，3 B—HSD)mRNA表达水平。 结果 各个浓度雷公藤内酯醇药物血清组肾上腺皮质细胞培养上清液中皮质酮 水平及细胞中3 B—HSD mRNA表达水平较对照组明显升高，泼尼松组均低于对照组 (P0．05)。 结论 雷公藤和皮质激素均有抗炎及免疫抑制双重作用，可用于治疗多种自身免疫性疾 病。临床研究发现，长期服用强的松虽能有效地控制病情，但是会抑制肾上腺皮质使血 总皮质醇含量明显低于正常，导致不同程度的柯兴氏综合征表现，还可并发糖尿病，对 机体危害较大。雷公藤多苷同时具有抗炎、免疫抑制及类皮质激素作用，却没有强的松 的副作用，经雷公藤制剂治疗后，皮质激素能顺利撤除或大大减量，既可避免长期服用 激素的副作用，又达到了有效的治疗目的。 但是，究竟雷公藤的“类皮质激素抗炎作用”的机制何在以及它对机体内分泌的影 响如何，目前仍缺乏足够的实验和临床研究资料，不利于指导临床进一步安全合理地使 用该药。 我们在前期的动物实验已经证实了雷公藤对HPAA具有促进作用。陈龙的研究结果 复旦大学硕士学位论文表明，雷公藤提取物能促进大鼠肾上腺皮质尤其是束状带细胞核DNA的功能活性，具 复旦大学硕士学位论文 表明，雷公藤提取物能促进大鼠肾上腺皮质