锯缘青蟹N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

锯缘青蟹N．乙酰一p．D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究致 锯缘青蟹N．乙酰一p．D-氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究 致 谢 本论文是在导师陈清西教授的悉心指导下完成的。陈老师广博的学识、严 谨的治学态度、崇高的敬业精神、执着的事业追求、循循善诱的教学作风和宽厚 待人的为人态度，使我受益匪浅、终生难忘。三年的博士生涯，陈老师在我的学 习上、工作上给我极大的关心和帮助，在本论文的研究和撰写过程中，倾注大量 心血，在此，谨向老师表以崇高的敬意和衷心的感谢! 此外，我要感谢实验室的老师与同学在三年来所给予的关心和帮助。三年 来，在实验室这个团结、温暖的大家庭中与同学老师的朝夕相处，让我留下了很 多美好难忘的时光!在今后的工作学习中，我将继续保持与发扬这种友好、团结 协作的精神! 最后，我要感谢我的岳母、妻子对我的理解和默默无闻的支持，在我三年 的学习生涯中，是她们为我辛苦的撑起了这个家，养育着我年幼的儿子，正是有 了她们的理解支持，我才能安心在这里完成我的学业l同时，为自己这三年来由 于时间的关系对家对儿子付出太少而感到深深的愧疚! 本研究为国家自然科学基金项目的一部分，在此，非常感谢 国家自然科学基金委的大力支持。 厦门大学学位论文原创性声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成 厦门大学学位论文原创性声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成 果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在 文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利 和责任。 声明人(签名)：事衣{}秒孬 川年朔乡21日 厦门大学学位论文著作权使用声明本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦 f-Jsk学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸 质版和电子版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允 许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关 数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密 的学位论文在解密后适用本规定。 本学位论文属于 1、保密()，在 年解密后适用本授权书。 2、不保密() (请在以上相应括号内打“√”) 作者签名：猴 日期；前钥3，日 导师签名。荐 日期：加缛／月7日 锯缘青蟹N．乙酰一争n氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究摘要 锯缘青蟹N．乙酰一争n氨基葡萄糖苷酶的性质及活力调控的研究 摘要 以锯缘青蟹(Scyllaserrata)内脏为材料，通过含0．2mol／LNaCI的O．Ol moFL Tris-HCl(pH 7．5)缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、Sephadex(3-100凝胶柱过滤层 析、DE-32离子交换柱层析，获得了比活力为7,990 U／mg的电泳单一纯N．乙酰 ．B．m氨基葡萄糖苷酶制剂(NAGase，EC 3．2．1．52)。该酶的等电点为4．68，分子 量约为132 kD，每个酶蛋白分子含有约1097个氨基酸残基，其中非极性占39．1％。 碱性占7。l％，酸性占24．O％，极性不带电荷的占29．8％。该酶含两个分子量约为 65．8kD的同型亚基，肽链间不含二硫键而肽链内含有二硫键。该酶为糖蛋白， 其中含糖量为12．85％(w／w)。以对，硝基苯．N．乙酰．IB-I)．氨基葡萄糖苷(pNP-NAG) 为底物，测得该酶在0．05moFLNaAc．HAc缓冲液(pH 5．8)中催化水解pNP-NAG 的最适口H为5．6，最适温度为50C；该酶在45(2以下，p144．6．8．6范围内稳定。 pH 5．8下，酶水解pNP-NAG的米氏常数j‰为0．424 4-0．012 mmoFL，最大反应 速度prm“为17．65 4-0．32 pmol·L-I．min1，反应的活化能为61．32 KJ／mol。 半胱氨酸的疏基、色氨酸的吲哚基、组氨酸的咪唑基、酸性氨基酸的B．羧基 和赖氨酸的￡一氨基是酶的活性功能基团。精氨酸残基、丝氨酸残基不是酶的活性 所必需。同时，酶分子链内二硫键的形成不是该酶活性所必需。30℃下酶活性中 心解离常数p疋为5．40，解离热焓△Ho为7．812 kcal／mol，表明与酶活性有关的 可解离基团是组氨酸的昧唑基；产物NAG与产物pNP的类似物苯酚、对羟基苯 甲酸对酶的抑制作用表明，酶催化底物pNP-NAG水解反应属有序双双机理。在 变性剂盐酸胍的作用下，酶分子的活力变化快于构象的变化，说明酶分子的活性 中心处于对胍较敏感的区域。 养殖水体中富营养化产生的氨态氮，S03一对酶有较强的抑制作用。水体主要 有机污染物苯酚对酶有明显的抑制作用，与苯酚相比，邻苯二酚对酶的抑制作用 减弱，对苯二