沙眼衣原体感染血清学免疫优势蛋白的筛选与优化-临床医学专业论文.docxVIP

月月数据 月月数据 学位论文原创性声明 本λ郑戒严明所呈交的论文是找 +λ在功师指排下独立进行研究工作取得 的研究成果.除了立中特别加以标注引用的内容和政谢的地方外，论文中耳 、包含 任何其他个 λ或集体已经发裴或lfI写过的研究成果，与我-同工作的问志对本研 究所般的何才可提献均已在论文中作 f 明确的说明并农示 7谢意. 叫拙作者签名 主函泉一日期， r 年 y 月 I Fl 学位论文版权使用搜权书 本学位论文作#完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定.仰 学位有权将学位论文的全部!íl\部分内容自由入有关数据跟进行梭候，并采用影印、 编印或扫描 U 制手段保存 、lC编以供蛮倒和借阅.肉就学校向国章有关部门成 机构送交屹立 ，)1编λ￥f 先数据瘁. 本论文属于 保密 口在一一 仰后适用本授权书· 不剧 团 {请在相对应的方植内打 J ) 学位讼文作者签名 盈盈这_FlMνJJ年 ?月ln 导师签名 年如M1.1){r月 7日 天津 天津医科大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 中文摘要 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, C.t)引起的泌尿生殖道感染目前已成为 国内外最常见的性传播疾病之一[1]。沙眼衣原体感染引起的并发症较多且较严 重，该感染还显著增加HIV感染的危险性，并且可能与宫颈癌的形成有关[1]。其 感染的另一个重要特点是症状隐匿，感染者往往成为重要储主和传染源，为控 制沙眼衣原体感染，早期发现沙眼衣原体感染者并给与治疗，防止进一步传播 是重要举措之一。 目前我国临床上广泛使用的沙眼衣原体检测试剂盒针对的抗原多数是脂多 糖(Lipopolysaccharides，Lps)，主要外膜蛋白(Major Outer Oembrane Protein， MOMP)或热休克蛋白60(Heat Shock Protein 60,HSP60)[2]。然而Lps缺乏特异性， 和其他病原体的Lps抗原具有一定的交叉反应。近年来越来越多的研究显示 MOMP和HSP60虽有较好的抗原性和特异性，但不属抗原性最强的前20种蛋白之 列，因此用于检测的敏感性不够，可能导致误诊[3]。为了寻找更适合沙眼衣原体 感染筛查的方法，本实验选取近年来国外陆续报道的了8种沙眼衣原体免疫优势 蛋白进行蛋白的表达、验证，以MOMP和HSP60为对照，收集临床沙眼衣原体感 染者和未感染者的血清，ELISA方法检测血清中抗所表达衣原体抗原的抗体，寻 找适用于我国早期筛查沙眼衣原体感染的抗原蛋白组合。 目的：表达衣原体质粒编码蛋白3（Pgp3）、衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）、 C.t143编码蛋白（CT143）、C.t101编码蛋白（CT101）、C.t694编码蛋白（CT694）、 C.t875编码蛋白（CT875）、C.t813编码蛋白（CT813）、C.t119编码蛋白（IncA） 8种沙眼衣原体免疫优势蛋白，以MOMP和HSP60为对照，检测泌尿生殖道沙眼 衣原体感染者血清中10种沙眼衣原体蛋白的IgG抗体，比较上述几种蛋白的抗原 性，确定具有最高敏感性和特异性的抗原蛋白组合。优化适用于沙眼衣原体感 染血清学筛查的免疫优势蛋白的组合。 方法：将编码上述10种蛋白的基因重组质粒转化入大肠杆菌感受态BL-21， IPTG诱导目的蛋白的表达，GST Magbeads进行蛋白鉴定，用获取的蛋白裂解液 包被ELISA 96孔板。收集天津医科大学总医院性病门诊沙眼衣原体感染者血清 50份和未感染者血清30份，ELISA法检测血清中的相应特异性IgG抗体，将该结 果与血清学微量免疫荧光检测和生殖道分泌物沙眼衣原体细胞培养两种传统金 标准作比较[3-4]。 I 结 果 ： 1. 本 研 究 完 成 了 对 pGEX-6p-2/Pgp3 、 pGEX-6P-2/CPAF 、 pGEX-6P-2/CT143、pGEX-6P-2/CT101、pGEX-6P-2/CT694、pGEX-6P-2/CT875、 pGEX-6P-2/CT813、pGEX-6P-2/MOMP、pGEX-6P-2/IncA 和 pGEX-6P-2/HSP60 10 种重组质粒及 pGEX-6p-2 空载体质粒的提取、鉴定和测序。 2. 本 研 究 完 成 了 GST-Pgp3 、 GST-CPAF 、 GST-CT143 、 GST-CT101 、 GST-CT694、GST-CT875、GST-CT813、GST-MOMP、GST-IncA、GST-HSP60 10 种融合蛋白及空质粒 GST 蛋白的表达、纯化和鉴定。 3.50 份 C.t 感染者血清中 10 种沙眼衣原体蛋白的抗体检出情况： Pgp3 抗 体 88% （44/50）、CPAF 抗