山奈酚联合5-氟尿嘧啶抑制大肠癌生长的作用及其机制研究-中西医结合基础专业论文.docxVIP

中文摘要目的：探讨山奈酚、5-FU以及二者联合用药对大肠癌细胞的抗癌效果，评价其协同 中文摘要 目的：探讨山奈酚、5-FU以及二者联合用药对大肠癌细胞的抗癌效果，评价其协同 作用。从抑制增殖、诱导凋亡、抑制5．FU代谢的关键酶的作用三个方面探讨山奈酚协同 5-FU的作用机制。 方法： 1．山奈酚联合5．FU抗大肠癌细胞的作用：(1)通过MTT方法检测山奈酚、5-FU对大 肠癌(HCT-8、HCT_116)细胞活力的影响，并计算各药的IC50。(2)固定比率法观察不 同比率的山奈酚联合5一FU对大肠癌细胞HCT-8、HCT-116活力的影响，并计算Combination index(CI)，评价其协同作用。 (3)观察不同的比率的山奈酚联合5．FU对人胚肾细胞的 毒作用，确定5．FU及山奈酚的联合浓度。 2．山奈酚联合5．FU抗大肠癌作用机制研究：(1)大肠癌细胞经5．FU、山奈酚及两药 联合干预后，通过集落形成实验观察山奈酚联合5．FU对大肠癌生长的影响； (2)大肠癌 细胞经5．FU、山奈酚及两药联合干预后，通过流式观察山奈酚联合5．FU对大肠癌细胞周 期的影响；(3)大肠癌细胞经5．FU、山奈酚及两药联合干预后，通过Hoechst染色及流式 观察山奈酚联合5．FU对大肠癌细胞凋亡影响； (4)Q—PCR和Western Blot(WB)方法检 测凋亡相关基因Bax、Bcl．2、抑癌基因P53、5-FU相关代谢酶TS、DPD及相关通路的影响， 从抑制增殖、诱导凋亡、NN5．FU相关代谢酶等方面进一步阐明山奈酚联合5．FU抗大肠 癌的作用机制。 结果： 1．山奈酚联合5．FU抗大肠癌细胞的作用：(1)5-FU干预HCT-8和HCT-116细胞的IC50 分别为177．78 I．tM$177．63 lxM；山奈酚干预HCT_8和HCT-116细胞后分别为350 I．tM$1184．33 州。 (2)当5一FU浓度为50州，山奈酚浓度为100州时，联合用药组大肠癌细胞HCT-8 效果最佳，其CI=0．351(CI1)，表明二者具有协同作用，且作用显著。当5．FU浓度为20 gM， 山奈酚浓度为100州时，二者联合对HCT-116效果最佳，其CI=0．621(CI1)，表明二者具 有协同作用，且作用显著。 (3)5-FU与山奈酚联合干预HEK-293细胞，联合组的细胞毒 作用小于5．FU单独用药组，其CII，表明二者具有拮抗作用。 2．山奈酚联合5．FU抗大肠癌作用机制研究： (1)集落实验表明5．FU组及5一FU联合 IV 万方数据 山奈酚组，集落形成数量逐渐减少，表明5．FU联合山奈酚干预可显著降低HCT-8细胞的存 山奈酚组，集落形成数量逐渐减少，表明5．FU联合山奈酚干预可显著降低HCT-8细胞的存 活能力。 (2)细胞周期实验表明大肠癌细胞经5．FU联合山奈酚干预后，G1期比例升高， S期比例下调。 (3)通过Hoechst染色及流式观察细胞凋亡，发现联合组中细胞发生凋亡 的比例(31．41％)约为5．FU组(10．13％)的细胞凋亡率的3倍。 (PD．05)(4)QPCR 及WB实验表明联合组能够升高Bax的表达，降低Bcl．2的表达，且与单独用药组相比，具 有显著差异，且山奈酚组及联合组都有降低5一FU代谢相关酶TS和DPD，此外联合组显著 降低了由于5．FU干预引起的P13K及P—AKt的表达。 结论：山奈酚联合5-FU干预大肠癌细胞(HCT-8、HCT-116)，与单独用药相比， 能显著降低细胞活力，具有协同抗肿瘤的作用(CII)，联合组细胞凋亡率显著高于单 独用药组，且与单独用药组相比，山奈酚联合5-FU使凋亡相关基因Bax显著上调、Bcl-2 显著下调、且抑制5-FU相关代谢酶TS、DPD的表达，此外联合组显著降低了由于5-FU 干预引起的P13K及p-AKt的表达，表明山奈酚联合5-FU抗大肠癌的作用机制可能包括 调控P13K／Akt通路，协同抑制细胞增殖、诱导大肠癌细胞凋亡、抑制5．FU相关代谢酶 TS、DPD等。更进一步的作用机制有待更深入的研究以及动物体内实验的验证。 关键词：大肠癌，协同作用，山奈酚，5-FU V 万方数据 Abstractobjective：To Abstract objective：To find out whether Kaemp危rol combined with 5-FU show synergistic anticancer effect on colorecal cancer cellsand explore the mechanism of synergism from induce apoptosis．inhibit proliferation and inhibi