梨腐烂病菌GFP标记及其在梨组织中侵染的显微观察-植物病理学专业论文.docxVIP

分类号： 分类号： 密级： 华中农业大学硕士毕业论文 梨腐烂病菌GFP标记及其在梨组织中侵染 的显微观察 Microscopic Observation of Vaisa mali var．pyri Marked with GFP in Different Pear Tissues 研 究 生： 贾娜娜 学 号 2012301110170 指导教师： 王国平教授 洪霓教授 指导小组 王国平教授 洪霓教授 丁芳副教授 徐文兴副教授 王利平副教授 专业：植物病理学 研究方向：植物真菌学 获得学位名称：农学硕士 获得学位时间：2015年6月 华中农业大学植物科学技术学院 二。一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 独创性声明 卿 是否保密 舀 如需保密，解密时间 年 月 日 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外。论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 贸娜缃P 时间： 2DJ歹年 舌月3日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学．--y以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书。 黼张霞柙婶新牦嫩罕 签名日期： 2D占年 ∥月 3 日 签名日期：旆 彦月 歹 日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间 万方数据 梨腐烂病菌GFP标记及其在梨树组织中侵染的显微观察目 梨腐烂病菌GFP标记及其在梨树组织中侵染的显微观察 目 录 摘 要 i ABSTRACT ．．iii 缩略语表 ．v 第一章文献综述 1 1．1腐烂病菌及其侵染特性的研究 1 1．1．1腐烂病的危害与控制 ．．1 1．1．2苹果和梨腐烂病的病原 ．2 1．1．3梨腐烂病菌的生物学特性 ．2 1．1．4植物病原真菌侵染的研究 ．3 1．1．5腐烂病菌侵染的研究 ．4 1．2绿色荧光蛋白标记与农杆菌介导的遗传转化在植物病原真菌研究中的应用6 1．2．1绿色荧光蛋白标记在植物病原真菌研究中的应用 ．．6 1．2．2农杆菌介导的遗传转化在在植物病原真菌研究中的应用 ．7 1．3研究的目的和意义 9 第二章农杆菌介导梨腐烂病菌遗传转化体系的优化 ．10 2．1材料 10 2．1．1供试菌株 10 2．1．2供试培养基 10 2．1．3主要试剂 11 2．1-3．1抗生素 。11 2．1．3．2试剂 ．1l 2．2方法 ．11 2．2．1不同浓度潮霉素下梨腐烂病菌生长速率的测定 ． 11 2．2．2梨腐烂病菌分生孢子的诱导 11 2．2．3农杆菌菌液的制备 11 2．2．4梨腐烂病菌强、弱致病力菌株的转化 12 2．2．5数据统计分析 12 2．3结果 12 万方数据 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文2．3．1不同浓度的潮霉素对梨腐烂病菌生长的影响 华中农业大学2015届硕士研究生学位论文 2．3．1不同浓度的潮霉素对梨腐烂病菌生长的影响 一12 2．3．2农杆菌介导梨腐烂病菌遗传转化体系的优化结果 。13 2．4讨论． ． ． ． ． ． ． ． ． ． 1zI 第三章梨腐烂病菌强、弱致病力菌株转化子的获得 ．．16 3．1材料 ．16 3．1．1菌株 16 3．1．2引物 16 3．1．3试剂 ．16 3．2方法 ．16 3．2．1转化子荧光稳定性的测定 16 3．2．2转化子的验证 17 3．2．2．1病菌总RNA的提取 17 3-2．2．2 DNA消化 一17 3．2．2．3反转录合成eDNA 1 8 3．2．2．4 PCR扩增反应 一18 3．2．2．5琼脂糖凝胶电泳检测 一19 3．2-3转化子生长速度的测定及菌落形态的观察 19 3．2．4转化子致病力的测定 19 3．2．4．1分生孢子伤口接种方法的选择 一19 3．2．4．2转化子致病力的测定 一20 3．2．4．3数据统计分析 一20 3．3结果 ．2