来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白-ⅡN端肽抗乳腺癌转移作用的研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

目 录 摘要 1 前言 6 研究意义 12 实验材料 13 实验仪器 14 实验方法 15 结果 22 1 CXCR4 和 HER-2 在不同病理类型乳腺肿瘤组织中的表达情况以及与淋巴 结转移相关性分析 22 2 NT21MP 作用后 SKBR3 和 MCF-7 细胞株 CXCR4 的表达 23 3 筛选 CXCR4 与 HER2 均高表达的人乳腺癌细胞株 25 4 NT21MP 对 SKBR3 细胞中 CXCR4 和 HER-2 表达的影响 27 5 筛选同时高表达 HER2 和 CXCR4 的小鼠乳腺癌细胞株 30 6 荷乳腺癌小鼠模型中检测 NT21MP 抗乳腺癌转移效应 31 7 NT21MP 及 Herceptin 对 SKBR3 细胞增殖及周期的影响 36 讨论 38 结论 46 参考文献 47 主要缩略词 54 综述 55 PAGE PAGE 1 来源于病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ N端肽抗乳 腺癌转移作用的研究 摘 要 目的：观察趋化因子受体 CXCR4和酪氨酸激酶受体HER2 在乳腺肿瘤组织中的表 达情况，并分析与淋巴结转移的相关性。检测 NT21MP（HHV8 MIP N端肽）对 CXCR4 的表达及对荷乳腺癌小鼠肺转移的抑制效应。方法：1. 收集临床不同分期 的乳腺癌标本的石蜡切片，免疫组化法检测 CXCR4和 HER2的表达；2. RT-PCR和 Western-blot检测 NT21MP对 MCF-7和 SKBR3 细胞CXCR4表达的影响，并采用 RT-PCR 和 免疫组化 检测 MCF-7 和 SKBR3 细胞 中 CXCR4 和 HER2 的 表 达 ； 3. RT-PCR 、 免疫组 化 和 Western-blot 检测 NT21MP 单独及 联 合 Herceptin药物对 SKBR3细胞 CXCR4和 HER2表达的影响；4. 建立荷乳腺癌小鼠模型，实验分组： NT21MP 5 μg/kg、50 μg/kg 和 500 μg/kg组、联合用组（NT21MP 50 μg/kg＋Herceptin 36.04 mg/kg）、阳性对照组（Herceptin 36.04 mg/kg）、生理盐水对照组和空白对照组； 5. 抽取小鼠血液检测肝肾功能，处死小鼠剥取肿瘤并称重；6. HE 染色观察肺转移 情况，并用 Bouin液浸泡后计数肺表面转移结节；7. 免疫组化和 TUNEL法分别检 测 原 位 乳 腺 癌 组 织 的 PCNA 表 达 和 凋 亡 情 况 ； 8. MTT 法和 流 式 细 胞 术 检测 NT21MP 单独及联合 Herceptin 药物对SKBR3细胞增殖和周期的影响。结果：1. 免 疫组化显示 CXCR4的表达程度与乳腺癌恶性程度相关，并与HER2表达具相关性； 2. NT21MP下调乳腺癌细胞 SKBR3和 MCF-7中 CXCR4的表达，存在细胞差异性， 对MCF-7作用更显著（p0.001）。SKBR3和 MCF-7 中CXCR4呈无差异性高表达 （p0.05），HER-2 在 SKBR3细胞中的表达明显高于MCF-7（p0.01）；3. NT21MP 下调SKBR3细胞 CXCR4表达，Herceptin 显著下调 SKBR3细胞 HER2的表达，并 且下调CXCR4表达，以与 NT21MP 联合用药显著；4. NT21MP对肝功能无毒性作 用，与生理盐水对照组相比，血清ALT、AST和 ALP水平降低，具有剂量依赖性 （p0.05）；5. 相对于生理盐水对照组，NT21MP剂量依赖性地抑制肿瘤生长， NT21MP 5 μg/kg、50 μg/kg 和 500 μg/kg组瘤重分别为0.52±0.071 g、1.63±0.073 g、 2.51±0.086g（p0.05），相对于Herceptin单独用药组，联合用药后抑瘤作用更明显， 瘤重分别为1.70±0.137g、1.17±0.045g（p0.05）；6. 生理盐水对照组小鼠（6只）肺 内均见转移灶，小鼠肺脏表面可见多个散在的，并且体积较大的白色肿瘤转移结节， 可见瘤栓。NT21MP能呈剂量依赖性降低肿瘤的肺转移，减少肺表面转移结节的形 成。Herceptin单独用药组（5/6）发生肺转移，肺表面可见散在的、小的肿瘤结节。 联合用药组（3/6）发现肺转移，转移灶明显变小，肺表面未见明显的转移结节；7. NT21MP呈剂量依赖性下调乳腺癌组织中的 PCNA表达（p0.05）。NT21MP高剂量 组及联合用药组细胞凋亡数明显增加（p0.05）；8. NT21MP对 SKB