微柱凝胶免疫检测专业技术博迅产品操作03版.pptVIP

微柱凝胶免疫检测技术; 反应原理 微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（Microcolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHA）。 在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。;;产品操作;检测标本的准备 1.标本要求用EDTA抗凝管采集的新鲜血（如陈旧血需设阴性对照）。 2.抗凝血样标本要上清澄清。如有纤毛状、浑浊、乳糜、溶血、脂肪等状，应 再次洗涤离心。为防止纤维蛋白影响红细胞沉降，建议使用红细胞稀释液。 3.血辫血样须放置试管中离心处理，确保血清澄清微黄。必要时需洗涤。 4.在18-25℃条件下平衡30分钟，防止冷凝集。 红细胞悬液的制备 1.??红细胞配制为0.8%的悬液，最高浓度不要超过1% 。如:取8μl 压积红细胞，加入到1ml的红细胞稀释液（抗人球蛋白试验要求用低离子液配置红细胞悬液）中，配制出的红细胞悬液浓度大约为0.8%。 2.外观检查呈均匀淡红色，无血块、无絮状物（如有纤维蛋白需去除）。;;4+ 红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面 3+ 大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部 2+ 大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部 1+ 红细胞复合物位于凝胶中下部 ± 与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为± - 红细胞完全沉积在凝胶管尖底部 完全溶血 凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色 不完全溶血 残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色 混合凝集 红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部;三、标准操作规程; 1、ABO、RhD血型定型检测卡（单克隆抗体） 操作步骤： 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将待检者血浆分别加入5-6管中，各50μl； ;3）将待检者0.8%红细胞悬液分别加入1-4管中，各50μl； ; 5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 6）结果判读。 ;; 3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 4）结果判读。 ; 3、Rh血型抗原检测卡（单克隆抗体） 操作步骤: 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将待检者0.8%红细胞悬液分别加入1—6管中，各50μl；; 3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 4）结果判读。 ; 4、抗人球蛋白检测卡—不规则抗体筛检 操作步骤： 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ筛检红细胞各50μl分别加入对应的微管中; ; 3）将待检者血浆各50μl分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中； 4）37℃孵育15分钟； ;5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 6）结果判读。 ; 5、抗人球蛋白检测卡—交叉配血试验 操作步骤： 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将供血者0.8%红细胞悬液与受血者血浆各50μl先后加入主侧管中； ; 3）将受血者0.8%红细胞悬液与供血者血浆各50μl先后加入次侧管中； 4）37℃孵育15分钟； ; 5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 6）结果判读。 ; 交叉配血实验注意事项 1.应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入2℃-8℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。 2.红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。 3.血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。 4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。 5.每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。 6.红细胞悬液的浓度应为0.8%，不得超过1%。 7.使用低离子液（Liss液）稀释红细胞可增强敏感性。 8.检测卡应放