经皮骨折端扩新术治疗实验性骨不连过程中内源性BMP-2与VEGF表达与其相关性研究.pdfVIP

经皮骨折端扩新术治疗实验性骨不连过程中内源性 BMP一2与VEGF表达及其相关性研究 尽管90％～95％的骨折都能够治愈，但骨不连仍是目前骨折治疗中必须面对的难 题之一【l】。迄今针对骨不连的许多治疗方法都存在着一定的缺陷，因此探讨一种安全有 效和简便微创的治疗方法是十分必要的。文献检索证实，经皮骨折端扩新术的是治疗骨 不连及骨折延迟愈合的一种新探索，该技术通过对经久不愈的骨折端实施多点、多面的 微创处理，可以重新激发和诱导骨折端的炎症反应和修复机制，这一点已为我院既往的 实验研究所证实。初步的临床应用结果也表明，该技术对于骨不连的治疗结果是令人满 意的，并具有不开刀，创伤小，无需特殊麻醉和设备，操作简便安全，以及治疗费用低等优 点。但实施经皮骨折端扩新术后骨折端的多种骨生长因子于何时何处以及通过何种方 式发挥作用，目前还没有进行相关的研究。 骨折愈合的组织学变化过程伴随着复杂的生物学调节机制，大量细胞因子在不同的 骨折愈合阶段发挥着不同的作用f2】。其中骨形态发生蛋白(bone protein， morphogenetic BMP)对骨祖细胞的增殖和分化发挥着决定性作用，是促进成骨的重要因子。同时，许多 研究表明血管内皮细胞生长因子(vascIllarendothelialfactor，ⅥⅪF)对骨折后早 growth 期新生组织的血管形成至关重要【3】。Deckers等【41发现在骨折修复的早期，骨折端血肿 等【51发现，在体外培养的骨髓细胞、问充质干细胞和成骨细胞等细胞中，BMP和VEGF 可以相互促进表达。由此可见，内源性的BMP与VEGF在骨折愈合过程中的协同作用 是很值得关注的。而这两种因子在经皮骨折端扩新术治疗骨不连过程中如何表达?其 相关性如何?这将是本课题研究的关键所在。本实验采用自行设计的有限(微创)手术 技术，通过对经久不愈的骨折端进行多点微创处理和动态观察，并检测手术对骨折端内 源性BMP一2与VEGF表达情况的影响，观察这两种生物因子的相互作用，以求从分子 生物学层面解释经皮骨折端扩新术治疗骨不连的作用机制，旨在为临床推广应用该项技 术提供充分的实验依据。 直鐾直匡堂瞳塑±堑塞生堂垡迨銮(：!QZ生2 1．材料与方法 1．1动物模型制备 醉后，仰卧位固定，术区剪毛，碘伏酒精消毒，铺洞巾。取双侧前肢中段桡侧骨凸起处做 约3．Ocm纵形切口，逐层切开，保护血管、分离软组织后显露桡骨。在距桡骨远端2cm 处用线锯截断桡骨，再向近端距第一截骨线1．Ocm处做第二截骨线，切除1．Ocm骨段， 彻底止血、冲洗后依次缝合筋膜与皮肤，无菌敷料绷带包扎。术后肌注青霉素针剂每次 50万单位，1次／日，连续5日。在相同条件下用标准饲料分笼饲养。由于兔前肢的上下 尺桡关节先天性骨性融合，桡骨离断后尺骨可发挥很好的支撑作用，故骨折端稳定性好， 不需要内外固定。10周后通过X线检查确认：除5只因饲养不当死亡外，有7只兔一侧 肢体骨缺损达到骨愈合，其余48只兔形成骨不连接模型。本实验模型是在白志刚和初 同伟骨不连接动物模型的基础上稍加改动制成巧,el。 1．2分组 将48只骨不连模型动物的右前肢作为实验侧，实施经皮骨折端扩新术。左前肢作 为对照侧，不做任何处理。 1．3手术及方法 术前准备及麻醉与制备动物模型时相同，在实验侧(右前肢)用手触摸确定骨不连间 隙，从桡骨前外侧用微型骨刀经皮插入骨不连间隙，从不同方向反复切割和剥离骨不连 间隙内的纤维结缔组织并且扩新骨折断面，然后以骨不连问隙为中心，分别在骨折远近 两端各l～1．5cm范围内作环形剥离(应环绕骨骼周径的2／3以上)，剥离时应将外骨痂 连同其表面的软组织一并剥起，以便形成许多依附在周围软组织上的骨痂碎块、碎片或 骨碎屑包绕在骨折端周围。术毕伤口无需缝合，无菌绷带包扎。对照侧不做任何处理。 1．4标本处理 分别于经皮扩新术后24小时、72小时、1周、3周、5周、8周时分6批次各随机抽取 8只动物，先行拍摄x线片，然后用气体栓塞法处死，于双前肢桡骨骨折端取材(切取以 骨折端为中心2cm的骨段)。肉眼大体观察后用生理盐水冲洗，立即置于4％多聚甲醛