生物转化在天然产物研究中的应用.pptxVIP

10. 生物转化在天然产物 研究中的应用 ;一、引言 二、生物转化应用于甾体药物合成 三、 生物催化不对称合成 ;一、引言 生物转化是一种以生物工程方法，以微生物或酶进行的有机化学反应。例如，在非活性碳原子上引入羟基：;再例：;又如：; 再如生物转化在脱氢方面的应用，抗炎药物乙酸强的松可由乙酸可的松C-1,2位去氢制得，它的抗炎作用比乙酸可的松强3~4倍，副作用也小。以前用二氧化硒法脱氢，收率低，而采用简单节杆菌脱氢，收率高达85%左右。 ;二、生物转化应用于甾体药物合成 ; 1968年，全世界约70%的甾体药物是从墨西哥产的薯蓣皂素作起始原料进行生产。下图表示由薯蓣皂素及中间体ADD出发生产的甾体激素。 ; 近年来随着新甾体药物的发现，生产的发展，生产规模的扩大，原料需要量也逐年增加；另一方面由于不合理的采掘，造成资源逐年短缺，植物中皂苷含量下降，使在国际市场上供需间出现矛盾，薯蓣皂素的成本飞涨。日本及美国的一些学者着手进行扩大资源的研究。 ;例一些常见甾体资源：;ADD的进一步分解： ;2. 甾体侧链的选择性降解 甾醇代谢过程中，希望某中间体累积，一般可采用诱变，使微生物失去进一步分解该中间体的能力；或加入酶抑制剂，使参与该反应的酶失活。 (1) 通过诱变技术选择性降解甾体侧链 通过诱变技术得到选择性降解甾体侧链而不导致甾体母核破坏的生化阻断突变株。诱变一般是采用物理方法如紫外线照射，化学诱变剂如N-甲基-N’-亚硝基胍等。 由诱变产生生化阻断的突变株中，由于酶的缺损，导致甾体降解不完全，使发酵液中能产生大量积累所需产物的中间体，如4AD、ADD等。;(2) 酶抑制剂存在下甾体侧链的选择性降解 甾体化合物如胆固醇等的微生物降解历程是侧链端甲基的羟基化，羟基被氧化形成羧基，羧酸的β-氧化而导致碳链的缩短。当侧链断裂以后，发生9位羟基化，接着B环的开裂，再进一步分解而产生二氧化碳和水。所以9位羟基化是甾体母核分解的开始，若能抑制9位羟化酶，有可能使ADD积累，供进一步合成其它药物用。 已知9位羟化酶是单一氧化酶，具有几个蛋白质并形??一个电子转移链，其中有的蛋白质是以Fe2+作为必需金属离子的蛋白质，除去或取代了这一金属离子就使酶完全丧失活力。因此常用金属螯合剂来除去Fe2+，或用性质相似而无活性的离子来取代Fe2+。 ; 金属螯合剂中必须具备Fe2+螯合能力及亲脂性，例如，α,α’-联吡啶、邻二氮杂菲及8-羟基喹啉的效果较好。乙二胺四乙酸(EDTA)螯合能力很强，但是在脂肪族分子中又带有负电荷，亲脂性差，不能抑制9-羟基化酶，使ADD积累。但是使用时同时加入表面活性剂，如月桂基硫酸钠或十六烷基三甲基铵溴化物，同样也能使ADD积累。;(3) 侧链降解实例 周维善等曾从胆固醇乙酸酯和β-谷甾醇乙酸酯经三步化学反应制得19-羟基胆固醇乙酸酯和19-羟基-β-谷甾醇乙酸酯，将这两个化合物分别用分支杆菌-209-20转化，结果19-羟基胆固醇乙酸酯和19-羟基-β-谷甾醇乙酸酯的侧链被降解，得到产物19-羟基-4-雄甾烯-3,17-二酮，产率分别为67%和57%。19-羟基-4-雄甾烯-3,17-二酮可以作为合成19-去甲甾体药物的原料，而且这一步微生物转化可以在较高的底物浓度下进行。 ;3. 甾体生物转化的反应类型 除了上述甾体侧链的降外，甾体生物转化的反应类型主要还有以下三类。 (1) 羟化反应 羟化反应是最重要的微生物转化，专一性较强，其中以C-9α、C-11α、C-11β、C-16α、C-16β、C-17α、C-19角甲基和侧链C-27位上的羟基较为重要。 羟基形成的机理可能为：转化到甾体上的羟基是直接取代甾体碳架上的氢的位置，且取代过程中没有产生立体构型的变化，也不是通过形成烯的中间体来完成的，即羟基取代的立体构型(α或β型)是由氢原子原来所占的空间位置决定的。 ; C-11α、C-11β羟化的生物转化在抗炎药物的制备中经常用到，例由薯蓣皂素经开环、氧化、环氧化等生成中间产物16,17α-环氧黄体酮，用黑根霉在C-11α位上引入羟基，再经溴化氢开环脱溴，进行C-21碘置换，得抗炎药物乙酸可的松，见下图。此法工艺简便，总收率约34%左右。 ;(2) 脱氢反应 微生物对甾体脱氢经常发生在A环的C-1,2和C-3,4位之间。抗炎甾体药物的母核在C-1,2位导入双键后，能成倍增加抗炎作用。例如乙酸可的松C-1,2位导入双键生成1,2-脱氢乙酸可的松后，抗炎作用增加3~4倍。化学方法脱氢一般用二氧化硒法，收率较低，且产品中硒不易除尽，所以生物转化脱氢较化学方法好。 脱氢反应机理如下图所示，甾体C-1,2-脱氢是在酶与