六价铬致癌机制及绿茶拮抗作用的研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名：—— 日 期： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：——导师签名：——日 期： 山东大学顶十学位论文六价铬致癌机制及绿茶拮抗作用的研究 山东大学顶十学位论文 六价铬致癌机制及绿茶拮抗作用的研究 研究生寇琰 导师于素芳副教授 中文摘要 目的：Cr(V1)(hexavalent chromium)在工业上应用极广，已被国际癌症研究 所(1ARC)i正实是～种强致癌剂，可导致职业性肺癌 ，但其致癌机制还不是很 明确。近10余年来，分子生物学飞速发展，肿瘤发生机制的认识亦随之不断深 入。研究显示：癌基因的激活和抑癌基因的失活都是肿瘤发生的分子基础t 21，目 前已在多种人类肿瘤中发现此现象。但有关Cr(VJ)对细胞内癌基因和抑癌基因 水平的影响，国内至今报道很少。绿茶人们长期饮用，无毒作用，并具有多种 药理学功效，绿茶是否能够用于预防癌症，已经受到人们的关注。为了探讨Cr(VI) 化台物的致癌机制及绿茶对其的拮抗效应，以人胚肺成纤维细胞(HEL)为体 外培养实验模型，研究了重铬酸钾在体外诱导正常人胚肺细胞内癌基因及抑癌 基因表达的影响，进一步揭示Cr(VI)的致癌机制，同时研究了绿茶对Cr(VI)的 拮抗作用及其作用机制，为Cr(VI)化合物接触的职业性人群提供保健性饮料提 供科学依据。 方法：HEL细胞为受试对象，通过MTT试验检验Cr(VI)、绿茶对HEL细胞 存活率的影响。Cr(V1)浓度为0、0．625、1．25、2．50、5．0、10．0、 20．011mol／L：绿茶终浓度为lmg／ml，处理时间为24h。普通光学显微镜观察 HEL细胞一般形态；吖啶橙染色法观察HEL细胞胞核的形态学改变。逆转 录聚合酶链反应法(RT．PCR)测定5．09mol／LCr(Ⅵ)、10．％mol／LCr(Ⅵ)、 5．0¨mol／LCr(V1)+绿茶、10．0pmol／LCr(V1)+绿茶各组HEL细胞内p53、bcl一2 转录水平。免疫组化法检测P53、Bcl．2蛋白水平及蛋白定位。 结果：在O．625Hm01，L～20”mol／L处理浓度范围内，Cr(Ⅵ)可明显抑制HEL 细胞增殖，并呈浓度依赖性。 1．251amol／L～201amol／L Cr(Ⅵ)处理组细胞存活率 山东大学硕十学位论文与剧照组相比均有显著性差异(P0．05)。绿茶与Cr(V1)共同处理组细胞存活率 山东大学硕十学位论文 与剧照组相比均有显著性差异(P0．05)。绿茶与Cr(V1)共同处理组细胞存活率 与O 625[amol／L～10．Op_mol／L Cr(V1)各处理组相比明显增高，具有统计学意义 (P0．05)；与20．0I．tmol／LCr(Ⅵ)处理组相比没有差异。HEL细胞在Cr(VI)处理 24h后，形态发生了明显的变化，出现胞体变小，变圆，结构不清，胞质中含有 大量空泡和颗粒，有的细胞悬浮或死亡。吖啶橙染色可见Cr(VI)处理组细胞 变小，核固缩，核质比变大，细胞核内可见致密、浓染的黄绿色颗粒状荧光， 并靠近于核膜周边：绿茶处理组可拮抗Cr(VI)对细胞形态及对胞核形态 的改变，使细胞及细胞核趋于正常形态。5、10 Jamol／LCr(VI)处理组细胞 p53 mRNA、bcl．2 mRNA表达水平明显高于对照组，具有显著性差异(PO．05)： 绿茶处理组p53 mRNA、bcl．2 mRNA表达水平降低，与Cr(VI)处理组相比具有 显著性差异(PO．05)。5、10¨mol／L Cr(VI)处理组细胞P53蛋白、Bel．2蛋白 表达量均高于对照组(P0．05)；绿茶处理组P53蛋白、Bcl一2蛋白表达水平降 低，与Cr(Vi)处理组相比具有显著性差异(PO．05)。 结论：Cr(VI)可抑制HEL细胞增殖，引起细胞形态改变：Cr(V1)可增加p53、 bcl．2转录活性及诱导P53、Bcl一2蛋白表达，提示p53、bel．2基因及其蛋白过表 达在Cr(VI)导致细胞癌变过程中具有重要作用。