课件：临床微生物学尿培养操作规范演示课件.pptVIP

２．细菌培养： （１）普通培养：将收集标本的容器轻轻旋转混匀，　用定量接种环分别取尿液1ul涂抹接种血平板和麦　康凯平板（或中国蓝平板），35～37°C培养18～　24h，观察结果。对导尿、耻骨上膀胱穿刺和已使　用抗生素治疗的患者标本应增加一个10ul接种量。 （２）特殊培养：对怀疑有苛养菌感染者应采用耻骨　上膀胱穿刺法或导尿法采集标本，加种一块巧克力　平板，置5%CO2环境中培养48h。检查淋病奈瑟菌、　结核分枝杆菌感染时无需做定量培养，可将标本离　心后取尿沉渣进行培养，以提高阳性率。 （３）普通培养18～24h无细菌生长时，应将所有培　养基继续培养24h。 四、结果观察和报告１．结果观察和评价：（１）菌落计数：计数平板上的菌落数，采用1ul接种量者，将菌落数乘以103；采10ul接种量者，将平板菌落数乘以102，即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）。如菌落生长过多无法精确计数时，则报告＞105CFU/ml。 （２）结果评价：正常情况下从肾脏排泌至膀胱的尿液是无菌的，但膀胱中的尿液经尿道排出体外时可受到下尿道中正常菌群的污染而出现细菌。因此对不同方法获取的尿液标本培养结果需正确评价，才能有效指导临床合理治疗。一般认为，清洁中段尿标本中单种细菌菌落数＞105CFU/ml可能为感染；＜5×104CFU/ml可能为污染，在两者之间需要根据具体情况进行评估（表2）。 表２ 不同方法采集的尿标本培养结果评价 　　　　　 标本来源 　菌落数CFU/ml 　　　结果评价 清洁中段尿 ＜5×104 无意义，仅报告菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是混合菌生长 纯培养有意义，报告菌落计数和菌种鉴定及药敏试验结果；混合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检，并报告镜检结果 (5～10)×104 纯培养或混合菌生长，其中某种细菌数≥105者有意义，需进行细菌鉴定及药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，报告标本污染 ＞105 3种以内细菌生长都有意义，对2种主要生长菌需进行菌种鉴定及药敏试验；4 种及以上细菌生长无意义，报告标本污染 ＞103 导尿 都有意义，所有细菌均需做菌种鉴定及药敏试验 任意数目 耻骨上膀胱穿刺 ２．阴性培养结果报告： 培养48h无菌落生长，即为阴性。接种1ul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数＜103CFU/ml”；接种10ul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数＜102CFU/ml”。 ３．阳性培养结果报告：应报告细菌种属名称、菌落计数和药物敏感性试验结果。如：大肠埃希菌生长，菌落计数＞105CFU/ml，药物敏感性试验结果：…… 附录１．关于尿培养标本的接种： 由于自然排尿收集的标本很难避免会阴部及下尿道细菌污染，所以需要定量接种、合理评价才能判断培养的细菌是否与尿路感染有关。定量接种的方法有直接划线法和倾注平板法二种，后者由于操作繁琐，已几乎不被临床实验室使用。直接划线法的关健是保证接种量的准确性，可使用1ul或10ul的定量接种环，方法是将接种环校准后，以垂直方向持拿，使环圈刚好浸入尿液表面（不可使尿液碰到环上方的环柄），取尿液进行接种。无量接种环的实验室，可使用无菌的5ul微量移液器吸取尿液加入平板，再用接种环划线接种，将平板菌落数乘以200，即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）。 ２．关于尿培养检验培养基的选择： 没有一种平板可以适合所有尿道病原体的生长，所以应该根据标本来源及临床对目标菌的要求选择合适的培养基和培养条件。普通培养推荐使用血平板和麦康凯（或中国蓝）平板，不能以血平板代替麦康凯或中国蓝平板。 ３．关于尿培养结果评价： 菌落计数＞105CFU/ml只是诊断尿路感染的一般标准。对一个实验室而言，如果仅使用一个标准对实验结果进行解释，那么若标准制定过松，将会造成抗生素滥用和不必要的资源浪费；制定过严，将有可能导致尿路感染的漏诊。所以每个实验室应在与临床医生密切合作的基础上，根据不同的情况制定不同的解释标准。尿培养菌落计数可受多种因素的影响，在一些患者即使菌落计数较少，也有明显的临床意义，所以对菌落计数＜5×104CFU/ml，“规范”中认为无意义的阳性结果，不应随意丢弃，必要时应根据患者的具体情况或与临床医生联系后，决定是否需要做细菌鉴定和药敏试验。  以下因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应予以注意： （１）使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制； （２）尿液稀释，尿比重＜1.003，营养成份减少，