雷帕霉素对大鼠脊髓损伤后神经元自噬及凋亡的影响-外科学(骨科)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 英汉缩略词表 2 中文摘要 3 英文摘要 4 引 言 6 材料与方法 8 实验方法及步骤 11 结 果 16 讨 论 错误!未定义书签。 结 论 27 参考文献 28 附表 BBB 评分项目表 30 致 谢 32 综 述 33 1 福建医科大学 福建医科大学 2012 届硕士研究生毕业生毕业论文 英汉缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 SCI Spinal cord injury 脊髓损伤 T9~11 Thorax 9~11 脊锥胸段 9~11 Rap Rapamycin 雷帕霉素 LC3 Tiny tubes related proteins 1 light chain 3 微管相关蛋白 1 轻链 3 Caspase-3 caspase-3, human, recombinant, solution 半胱氨酸蛋白酶 3 CNS Central nervous system 中枢神经系统 BBB Basso-beattie-bresnahan BBB 运动功能评分 DEMO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 mTOR mammalian Target of Rapamycin 雷帕霉素靶蛋白 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 Texas Red Texas Red 德克萨斯红色荧光 DAPI 4,6-diamidino-2-phenylindole 4,6-二脒基-2-苯基吲哚 mp Rotate per minute 每分钟转数 m minute 分钟 h hour 小时 d day 天 s second 秒 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PBS-T Phosphate buffered solution- Twain 20 含 0.05%吐温-20 的 pH7.4 的磷酸盐缓冲液 2 雷帕霉素对大鼠脊髓损伤后神经元自噬及凋亡的影响 【摘要】 目的 观察雷帕霉素（Rapamycin）对大鼠脊髓损伤后脊髓运动功能行为学的变化 和病理改变，探讨雷帕霉素对急性脊髓损伤后神经元的保护作用及可能机制。 方法 150 只 SD 大鼠按随机数字法分成假手术组、损伤组和雷帕霉素治疗组， Allen 法建立大鼠脊髓损伤模型，分别于损伤后 8h、24h、3d、7d、14d 等 5 个 时相点采用 BBB 评分法进行脊髓功能评分，后处死大鼠取损伤区脊髓组织观察组 织病理，免疫荧光双标观察神经元 LC3 表达及神经元凋亡情况， Western blot 检测 LC3 及 Caspase-3 表达，电镜观察神经元显微结构变化。 结果 （1）BBB 评分结果：假手术组脊髓神经功能正常，BBB 评分达 20 分；损伤 组和雷帕霉素治疗组均有神经功能障碍表现，其中术后 8h、1 d 评分均小于 2 分，差异无统计学意义（P＞0.05），术后 3 d 后治疗组经治疗后神经功能较损伤 组明显改善，分值随时间增加而变大，两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。(2) HE 染色结果：假手术组见脊髓灰白质界限清楚、神经元及髓鞘结构正常；而损 伤组和雷帕霉素治疗组均有不同程度的变化，从局部片状出血、周围炎性细胞的 浸润、神经元胞体的萎缩、胶质细胞的反应性增生、白质呈网状脱髓鞘及瘢痕形 成，且治疗组明显轻于损伤组。(3)与损伤组相比，雷帕霉素治疗组相同时相点 LC3 阳性神经元增多，凋亡细胞减少（P0.05）；(4)Western blot 示 LC3Ⅱ损伤 后第 3 天达高峰，同时相点雷帕霉素治疗组表达较明显， Caspase-3 损伤第 7d 后开始下降，同时相点雷帕霉素治疗组表达较少（P0.05）；(6)电子显微镜下损 伤组及雷帕霉素治疗组神经元内均可见自噬小体及自噬溶酶体。 结论 大鼠脊髓损伤后早期，应用雷帕霉素可增强大鼠脊髓损伤后神经元自噬， 减少神经元细胞凋亡，在一定程度上对神经元具有保护作用，从而促进大鼠运动 功能的恢复。 关键词：脊髓损伤 雷帕霉素 自噬 LC3 Caspase-3 3 The effects of rapamycin on neuronal autophagy and apoptosis after Spinal Cord Injury in rat. Abstract Objective To observe the functional and pathology changes ， and to explore the protective effect and possible mechanism of rapamycin to the neur