补充HMB可经由mTOR通道刺激大鼠骨骼肌肥大.ppt

評論 優點： 在討論部分進行多方面比較。 列出本篇研究不足處，並提出未來研究方向。 實驗設計說明詳細。 缺點： 實驗分組定義不明確。 (有、無補充HMB、健康與坐式生活) Thank you for your attention! 補充HMB可經由mTOR通道刺激大鼠骨骼肌肥大 報告學生：涂君瑋 報告日期：2011.03.10 β-Hydroxy- β -methylbutyrate (HM β) supplementation stimulates skeletal muscle hypertrophy in rats via the mTOR pathway. Pimentel et al. Nutrition Metabolism 2011, 8:11 前言 白胺酸： 刺激骨骼蛋白合成。 減緩蛋白質水解。 可代謝為HMB。 HMB： 抗分解代謝物。 降低因運動壓力、癌症、充血性心臟衰竭、敗血病和愛滋病所產生的肌肉萎縮。 (Hider RC, et al., 1969; Nissen S, et al., 1996; Caperuto EC, et al., 2007) 前言 HMB最佳劑量：3g/day，效果優於1.5g/day。 (Zanchi NE, Gerlinger-Romero F, Guimar?es-Ferreira F, et al., 2010) HMB可由KIC轉胺而成。 人體：約有5%白胺酸可轉化為HMB。 70公斤：0.2-0.4g HMB/day。 HMB為透過飲食而產生的蛋白質。 (Wilson GJ, Wilson JM, Manninen AH, 2008) 前言 評估HMB對類風濕性關節炎、愛滋病及肌肉損傷指標結果 → 生化指標呈現。 (Marcora S, et al., 2005; Paddon-Jones D, et al., 2001; Wilson JM, et al., 2009) HMB對骨骼肌的影響→多。 HMB對周邊組織(脂肪組織及肝臟)的影響→少。 肝臟的蛋白質合成與HMB的補充有關。 (Holecek M, Muthny T, Kovarik M, et al., 2009) HMB文獻大部分都是配合運動或其他分解代謝進行研究。 研究目的 補充HMB對骨骼肌肥大，包含胰島素訊息在內的蛋白質表現量有何影響。 方法_實驗動物 威斯達大鼠14隻(male)。 年齡：8 - 9週大。 體重：200 - 250g。 餵食低脂飼料且水量不限制。 日夜循環各12小時。 恆溫：22±1℃。 恆濕：60±5%。 本實驗在一週環境適應期後實施。 方法_HMB的補充 以胃導管(管飼法)餵食HMB。 劑量：320mg/kg BW，放入1ml水中稀釋。 每日餵食時間固定(在光照期)。 餵養一個月，直到大鼠3-4個月大。 方法_血糖及血脂測量 口服HMB後15-18小時、空腹12小時後。 動物以斷頭方式進行安樂死。 採取血液，將血清樣本存放於-80℃冰箱。 Labtest kits → 空腹血糖、總膽固醇、 HDL-c及TG濃度。 樣本以酵素法(Enzymatic Method)分析。 方法_血糖及血脂測量 LDL-c和VLDL-c： 以Friedwald公式計算 → LDL-c = total cholesterol-(HDL-c)-(TG/5) VLDL = TG/5 (Friedewald T, Levy RI, Frederickson DS, 1972) LDL-c子集合是良好的氧化LDL-c預測因子，用以下公式計算 → LDL-c = TG/HDL-c (Tsimihodimos V, Gazi I, Kostara C, et al., 2007) 方法_荷爾蒙濃度 血清空腹胰島素、睪固酮和腎上腺皮質酮以ELISA方式定量。 胰島素的ELISA kit → Millipore corp. 睪固酮及腎上腺皮質酮kit → Assay designs, Inc. 方法_以西方墨點法分析蛋白質 取伸趾長肌、腹膜後脂肪組織及肝組織 → 均質於1.5ml的緩衝液中 → 加熱至沸騰10分鐘 → 萃取液以轉速12000rpm於4℃離心40分鐘 → 移除不可溶解的物質。 方法_以西方墨點法分析蛋白質 將蛋白質加入含有二硫蘇糖醇的Laemmli sample buffer中 → 加熱至沸騰5分鐘 → 放入10% SDS膠體內 → 將蛋白質以電子轉移方式從膠體轉至硝化棉上 → 在Bio-Rad semi-dry transfer電泳槽中以固定15V電壓跑1小時。 非特異蛋白質結