硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维化及胆囊病变的实验研究-外科学专业论文.docxVIP

中山大学硕士学位论文 中山大学硕士学位论文 硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维化及胆囊病变的实验研究 究作前期探索。 材料和方法： 1取体重在250--3009(约3一周龄)健康雄性豚鼠50只，随机分成两组：对照组 10只；实验组40只(其中吖蚺作用模型六周组20只，作用模型九周组20只)。5 只／笼分笼饲养。对照组、实验组均予豚鼠基础饲料，不限量供应。对照组不限 量供应750mg／L Vit C饮用水；实验组予含浓度为0．03％TAA+750mg／L Vit C饮用 水诱导并不限量供应，配制后Ph值应为6．7～7．2，保证TAA的化学稳定性。各组 饮用水每两天配制更换。 2体重监测：每周同一天同一时段测体重。 3血清、肝脏、胆囊取材保存 3．1饲养第七周末、第十周末用同法处理模型六周组、模型九周组与对照组，利 用乙醚吸入麻醉后体外心脏穿刺采血(3-5m1)，剖腹后肝脏下缘上翻，靠近胆总 管结扎胆囊管，再游离切断肝脏血管及与周围组织器官韧带，完整取出肝脏及胆 囊，不结扎肝脏相关离断血管放血处死。离体解剖分离肝脏、胆囊。肝组织取自 肝右外侧叶1．5×1．5×0．3cm3大小固定在10％甲醛固定液中，用于常规伊红一苏 木素(HE)染色，Masson三色染色、Gomori银染色法。根据肝组织内纤维组织 增生状况分为5级：(SO无纤维化；Sl门管区纤维化扩大，局限窦周及小叶内 纤维化；S2门管区周围纤维化，伴纤维间隔形成，小叶结构保留；S3纤维间隔 伴小叶结构紊乱，无肝硬化；S4早期肝硬化。)。统计各组各个体肝纤维化程度。 3．2胆囊常规HE染色，观察胆囊病理改变及外观情况。 4血液标本4000rpm离心1 5min，取其血清600ul置于．20C冰箱保存备检。采 用放射免疫分析法测定各标本透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、IV型胶原(Ⅳ C)、III型前胶原(PCIII)血清值。严格按各试剂盒使用说明书操作，由SN．697 全自动双探头放射免疫Y计数器测沉淀物放射性计数。 5统计分析：所得数据用均数士标准差(x±S)表示。用SPSSll．0软件进行多组 资料t检验、相关分析、Fisher精确检验法，P0．05即认为差异有显著的统计学 意义。 结果： Ⅱ 中山大学硕士学位论文 中山大学硕士学位论文 硫代乙酰胺诱导豚鼠肝纤维化及胆囊病变的实验研究 1体重监测 1．1第一周体重：对照组、实验组按正常生理变化规律体重逐渐上升，体重增加 平稳。 1．2第二周后(实验组予吖蚺一周后)：对照组体重按生理规律体重变化逐渐上升， 体重增加平稳，豚鼠毛发顺畅光泽好、食欲正常、活动正常。实验各组：体重明 显下降，幅度最大者超过809，豚鼠毛发出现蓬松、食欲不振下降、活动减少， 尤以体重变化大者为甚。第三、四周后体重缓慢回升，以后呈小幅度升降，个别 逐渐上升。豚鼠毛发色泽、食欲、活动逐渐好转。 1．3对照组与实验组组间体重均数比较：第二周：模型六周组、模型九周组VS 对照组，P0．05，各组间体重均数比较差异无统计学意义。第七周：模型六周 组、模型九周组VS对照组，P0．05，对照组与实验模型各组比较差异有显著 的统计学意义。模型六周组VS模型九周组，P0．05，实验模型组间差异无统计 学意义。各实验组内个体体重变化存在差异。 2 HA、LN、IVC、PCIII血清值 2．1对照组：HA(250．71士72．37lag／L)、LN(35．39+10．mug／L)、Ivc(6．21+3．08pg／L)、 PCIII(2．86+1．9499／L)； 模型六周组：HA(233．64+67．62 ¨g／L)、 LN(44．61+12．88¨g／L)、IVc(8．52土2．40I-tg／L)、PCIII(87．49+32．9599／L)；模型九 周组：HA(85．59+35．9999／L)、LN(40．90i8．44蚓L)、IVCl3．40土1．9399／L)、PCIH (158．68士41．73lag／L)。 2．2 IV型胶原值、III型前胶原值均数比较：对照组、模型六周组、模型九周组相 继递增，各组间t检验P0．05，差异有显著的统计学意义；透明质酸值均数比较： 对照组、模型六周组、模型九周组相继下降，各组间t检验P0．05，差异有显著 的统计学意义；层粘蛋白值均数比较：对照组、模型六周组、模型九周组变化不 大，各组间t检验P0．05，差异无统计学意义。 3 肝脏组织病理改变与纤维化分级 3．1大体观察：对照组肝脏质地软、红润，实验组肝脏颜色不同程度变深，浅褐 色，质地稍韧。 3．2显微镜观察： Ili 中山大学硕士学位论文 中山大学硕士学位论文 硫代乙酰胺诱导