利用DREB转录因子改良小麦耐盐性的研究-作物遗传育种专业论文.docxVIP

摘 摘 要 盐害是小麦生产的重要胁迫因素，我国一些地区土壤盐碱化严重，所以通过基l=|ll：¨譬方法提 高小麦的耐盐性具有重要的理论意义羽J应川价值。 本研究利用分子生物学的实验手段．构建了包括来源予植物拟南芥的DREBIA(Dehydration Responsive Element Binding protein。一种逆境诱导转录网子，诱导相关抗逆基冈的表达)基因和心 于筛选转化植株的Bar基因(编码除草剂抗性)的表达载体。 以综合农艺性状较好的小麦品种H6756的932块幼穗愈伤组织为受体，明高压氮气基因枪 (PDSl000Prle)将DREBIA基因导入小麦，经愈伤及分化筛选成功获得了205株蒋生植株。经 除草剂Basra抗性筛选，其中有89株植株表现除草剂抗性。89株抗性植株再经PCR扩增和 Southern杂交鉴定．其中50株植株的基因组中整台有外源基因DREBlA．转化频率达到5 36％。 取31株转基因小麦的后代种子继续种植．获得的Tt代植株经分子鉴定，结果显示20个后代株 系的基网组中接合有DREBlA基因，证明DREBlA基因可以在转基因后代植株中相对稳定遗传。 下I代转基冈植株后代种子继续种植．获得的B代植株经PCR扩增希I Southern杂交鉴定，4个株 系中没有检测到DREBIA基因，而4个株系中DREBlA基因没有发生遗传分离，其它各株系表 现不同的分离比例，进一步证明了DREBIA基因在后代中可以相对稳定遗传，剪且以显性形式遗 传给后代。转DREBIA基因的小麦植株经初步耐盐试验表明。其耐盐性明显高于对照植株。在盐 胁迫条件下，转DREBIA基因小麦植株叶片的细胞表面糖蛋白层较为致密．而对照植株叶片的细 胞表面糖蛋白层出现细胞壁外缘脱落现象。 将DREBIA基因利用农杆菌介导法导入小麦H6756中。以小麦幼苗的茎尖分生组织为转化 受体，与农杆菌共培养后共获得247棵转化幼苗．经除草荆初步筛选．有66棵转化幼茁存活。 经PCR扩增鉴定，其中30棵幼苗证明整台有DREBIA基因，转化率达到12，l％。 本研究利用优化的基因枪和农杆菌介导两种基因转化体系．较好地克服了小麦转化受体的基因 型障碍，提高了小麦的基因转化效率，获得了耐盐性增强的转DREBIA基因小麦。 关键词：小麦：DREBlA基冈：基因枪转化；农杆菌介导：耐盐性 Ill AbstractThe Abstract The salt stress is all important factor influencing production of wheat．The soil of some areas of our courttry salinizes seriously,so it is very significance to improve the wheat’s salt tolerance by genetic engineering．． The plasmid expression vector including DREBIA gene and bar gene was constructed．DREBIA (dehydration responsive element binding)is a transcription factor and introduced the expression of a series of stress-related genes．The bar gene encodes the resistance to herbicide and is used to select the transgenic plants． The DREBlA gene in the plasmid pAHC25-DREBIA was transferred into 932 calli induced by young spikes of wheat cultivar H6756 by microprojectile bombardment，and 205 plantlets were regenerated through screening on the medium containing Basta．According to the resistance test by daubing with 100rag／1 Besta solution on the seedling leaves 89 transformed plarits survived．By PCR amplification and Southem Blotting,50 plants were identified to be the t