杉木材质相关MYB基因的表达及功能研究-林木遗传育种专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，是受国家 863 项目（2011AA100203）资助在指导教师指导 下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经 作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或 其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 论文使用授权的说明 本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件， 允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制 手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。□ 不保密, 本学位论文属于不保密。 □ （请在方框内打“√”） 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 指导教师亲笔签名： 日 期： I 摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘要 转录因子近年来已成为分子生物学研究的热点，通过特异性结合到靶基因调控区 的顺式作用元件上，调控靶基因的表达。MYB 转录因子是植物最大的转录因子基因 家族之一，在植物中起着重要的调控作用。杉木是我国南方重要的针叶速生用材树种， 用途广泛。因此，本文以杉木为研究材料，在本课题组分离克隆了 MYB 转录因子基 因的基础上对其进行了初步的功能分析。主要研究结果如下: 1. 基于本课题组克隆的两个杉木 MYB 基因，亚细胞定位结果表明：sGFP-ClMYB1 定位于细胞核中，而 sGFP-ClMYB2 不仅定位于细胞核，在细胞膜以及细胞质中的某 些细胞器上也存在。 2.利用实时定量 PCR 对这两个基因的表达情况进行了检测，结果表明：在六种不同 的器官中，ClMYB1 主要在针叶和木质化茎中表达，在其他器官的表达量都很低；而 ClMYB2 主要在根和木质化茎中表达，在雌花中的表达量最低。进一步的研究发现： ClMYB1 与 ClMYB2 有着类似的表达模式，都主要在木质化的茎中表达，且随着木质 化程度的增高表达量增加。在 ClMYB1、ClMYB2 与 12 个杉木木质素合成相关酶基因 的协同表达分析中，ClMYB1 与 ClCCoAOMT1、ClPAL3 呈显著正相关，ClMYB2 与 ClCCoAOMT1、ClPAL3 呈极显著正相关，与 ClCOMT、ClCCR1 呈显著正相关，这些 结果表明，ClMYB1、ClMYB2 可能通过正调控 ClCCoAOMT1 和 ClPAL3 基因来参与 杉木木材的形成。 3.组织原位杂交技术研究 ClMYB1、ClMYB2 在不同组织中的表达，结果表明：ClMYB1 主要在杉木嫩叶的维管组织中表达，ClMYB2 主要在根的木质部中表达，在嫩叶的维 管组织中稍有表达，表达信号不强烈。ClMYB1、ClMYB2 都主要在木质化茎的木质 部中表达。 4.异源转化本生烟草：经表型观测，转基因烟草叶片比对照小，但质感厚实，颜色比 对照的深，叶边缘褶皱，叶柄更硬挺。Wiesner 染色实验表明：转基因烟草第二节茎 切片跟对照没有差别都没有颜色，而第四、六节茎木质部的颜色都比对照深，呈深红 色。LTGA 法测定木质素含量表明：转基因烟草的木质素含量比对照的高。定量 PCR 检测结果显示：CCoAOMT1、CCoAOMT2、CCoAOMT3、PAL1、PAL4 在转基因中的 表达量都较对照的有所增长，CHS 的表达量降低，而 4CL1 的表达量没有明显的变化。 这些结果表明 ClMYB2 可能通过调控一些木质素合成相关基因的表达而参与木质素 I 杉木材 杉木材质相关 MYB 基因的表达及功能研究 的形成过程。 关键词：杉木；MYB 转录因子；定量表达分析；原位杂交；亚细胞定位；烟草转基 因 II AB ABSTRACT ABSTRACT Transcription factor has become popular in molecular biology in recent years, which specifically bind to the regulatory regions of target genes as cis- acting elements to regulate the expression of target genes. MYB transcription factor is one of the largest transcription factors in plants, playing an important role in the regula