灵芝肽的分离纯化及其保肝作用研究-食品科学专业论文.docxVIP

摘要本室前期工作已对灵芝肽进行了初步分离，并且证实灵芝肽是一种较好的抗氟 摘要 本室前期工作已对灵芝肽进行了初步分离，并且证实灵芝肽是一种较好的抗氟 化活性物质．为寻求灵芝肽最佳分离纯化条件并探讨其保肝功能，本实验采用配位 色谱法、离子交换柱层析、RP-HPLC，以灵芝样对羟基自由基的抑制率为抗氧化活 性指标，对灵芝肽进行了迸一步分离纯化；采用氨基酸分析仪、分光光度计、电位 测定仪比较了灵芝肽各组分的抗氧化能力和还原能力；采用生化分析仪、显微镜研 究了混合灵芝肽(MG对四氯化碳、乙醇诱导肝损伤小鼠的辅助保护作用。结果 如下： I．将发酵灵芝粉经水提、过分子量为10000Da的超滤膜后得小分子混合物GLLt 将未脱色GLL采用SephadexG．25、SephadexG．15进行分离，均未能将肽类物质 与色素分开；将GLL经活性炭脱色后采用Scphadex G·25、Sephadex G-15分离， 肽类物质无法与小分子糖类分开。采用配位色谱CuZ+-SephadexG·25柱可以将脱 色Gu，中肽类物质与氨基酸很好地分离，褥GLP．I、GLP．II、GLAA三个峰。 氨基酸分析表明612．I、GLP．II、GLAA中氨基酸总量分别为88．33％、91．01％、 93．18％，GLP．I与G廿．II中主要以酸性氨基酸为主，GU．I中酸性氨基酸占氮 基酸总量的39．3％：GLP．1I中酸性氨基酸含量占为总氨基酸含量的71．52％。GLP- II为高F值寡肽．GukA为高F值混合氨基酸。DEAE—Cellulose阴离子交换树 脂在可以将GLP，11分为三个级份；GLP．IIA、GLP-IIB、GLP-IIC；GLP．IIC 进一步经RP．HPLC分离后得2个峰。 2．MGLP在Cu“+抗坏血酸诱导卵磷脂脂质氧化体系及非脂质体系中抑制氧化能 力均高于GLP I、GLPII和GI_AA，在卵磷脂脂质氧化体系中其IC50为 0．984mg／ml其还原作用也优于GLP I、GLP II和Gu执。 3．MGLP对小鼠化学性肝损伤的保护作用： a)灌胃MGLP后，Ccl4诱导肝损伤小鼠体重明显增加，小鼠血清中谷丙转氨 酶(ALT)、谷草转氨酶(AsD活力，丙二醛(MDA)含量均有所下降．当MGLP 剂量为400mg／kg．bw和800mg／kg．bw时，血清中ALT及AST活力显著低于 CCl4模型对照组，肝组织病理学为阳性，MGLP对四氯化碳引起的肝损伤 有辅助保护作用。 b)MGLP可使乙醇诱导肝损伤组小鼠血清中还原型谷胱甘肽(GsH)含量明显 升高·丙二醛(MDA)、甘油三酯crG)含量明显降低。当剂量为800mg／kg．bw 时，血清中MDA和TG含量显著低于乙醇模型对照组。GSH含量显著高 于乙醇模型对照组，肝组织病理组织学结果为阳性，MGLP对乙醇引起的 肝损伤有辅助保护作用。 只芝肤的分离纯化及其保肝作用研究 关键词z 灵芝肤分离卵磷脂四氯化碳乙醇保肝 2 兰主奎些查兰!竺星堡圭兰垒鎏苎Study 兰主奎些查兰!竺星堡圭兰垒鎏苎 Study on Separation and Liver-Protection Effect of Peptides froin GanOderma Lucidum ABSTR ACT A good anti．oxidant peptide from Ganoderma Lucidum(GLP)were isolated preliminarily in our Lab．IIl order to find the best separation methods and research GLP’S liver-protection function，GIjP缸e purified further by ligand chromatography，ion—exchange chromatography,RP-HPLC according to the index of·OH inhibitory activities．The anti·oxidation and reductive abilities of the different components of GLP have been compared by means of the amino acids analysis，spectrophotometer and potentiometer． Using biochemistry analysis instrument and microscope，the assistant liver-protection cf耗cts against liver damaged mice ind