利用AFLP分子标记技术对部分菊花品种遗传多样性的研究-园林植物与观赏园艺专业论文.docxVIP

摘要菊花(DendranthemaXgrandiflorum(KamaO 摘要 菊花(DendranthemaXgrandiflorum(KamaO Kitam)起源于中国，是我国十大传 统名花和世界四大鲜切花之一。菊花品种繁多，种下变异极为丰富，具有重要的 经济价值。中国栽培菊花大约有3000个品种，具有悠久的栽培历史，株型、叶片、 花色，花瓣(小花)形态等都有非常丰富的变化。如此众多的品种和变异式样给品 种的分类、鉴定和品种权的保护带来极大困难。AFLP(扩增片断长度多态性)是一 种新的DNA分子标记技术，具有丰富的多态性、较好的稳定性和较高的个体特 异性，广泛应用于品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因定位等方面。 本试验在建立较稳定的菊花AFLP技术体系基础上，构建了26份菊花材料的图谱， 分析了其遗传多样性，以期为菊花品种鉴定、亲缘关系分析、高密度遗传图谱构 建、核心种质构建等奠定基础。 本文采用改良常规CTAB法提取菊花基因组DNA．其提取液成份 为：100mmo／／LTris-HCL(pH 8．0)’20mmol／LEDTA，1．4 mol／LNaCl，2％CTAB，2％ PVP40，50 mmol／L[3-巯基乙醇，租键后的DNA经RNase除去RNA：苯酣氯仿抽 提一次，氯仿／异戊醇抽提一次，去除蛋白质，DNA降解少，无蛋白质和RNA， 获得了高质量的扩增模板。在此基础上，得到清晰的菊花AFLP图谱，从而建立 了最佳的菊花AFLP反应体系。 利用AFLP分子标记技术研究26个菊花品种的遗传多样性，从64对引物中 筛选出的7对AFLP选择性引物对菊花种质资源进行了AFLP分析，都得到了清 晰的图谱，表明这些引物用于菊花AFLP分析是可行的。7个引物组合共扩增出 389条带，其中多态性条带294条，多态性占75．54％，平均每个引物组合扩出多 态性条带42，0条，每一个引物组合都可将26个品种完全分开。说明菊花存在丰 富的遗传变异，遗传多样性水平很高。 另一方面使用NTSYS2。0软件，通过UPGMA法对所褥的多态性标记进行聚 类分析，获得聚类树状图，其相似系数为O．61--0．85之问，结果表明26份菊花种 质之间遗传关系相对来说比较近。依相似性系数O．75为界，将供试材料分成了五 大类群。所得的试验结果与菊花传统分类法大体上相一致，其结果表明：AFLP 技术是一种重复性高、多态性丰富、安全可靠的DNA指纹技术，可作为菊花分 类的依据和基础。因此，AFLP技术在菊花品种分类和遗传多样性分析上的应用 是可行的。 关键词：遗传多样性； AFLP分析； 菊花品种； 聚类分析 AFLPAnalysB AFLPAnalysB for the Genetic Divenity of Some Chrysanthemum Species Abstract Chrysanthemum(Dendranthema Xgrandiflorum(RamaO Kitam)originated from Cllina．and it is one ofthe ten traditional famous flowers in China and the four famous cutting flowers in the world．There are lots of cultivars and variations among this cultivated flower．It is estimated that there are more thall 3,000 eultivars in Cllin丑11壕 protection and identification of chrysanthemum cultivats are important but di伍cult． AFLP(amplified fragment length polymorphism)is a n附DNA molecular marker technique with high efficiency,promptitude,stability and accuracy．It has been widely used in classification,eultivar identification,genetic mapping,breeding,location of target gencin animals and plants．In order to provide scientific basis for the identification,conservation and utilization of chrysanthemum ge