磷酸二酯酶抑制剂干预大鼠继发性脊髓损伤的实验研究-骨科学专业论文.docxVIP

邦卅I大学2004届研究生毕业论文磷酸二酯酶抑制剂干预大鼠继发性脊髓损伤 邦卅I大学2004届研究生毕业论文 磷酸二酯酶抑制剂干预大鼠继发性脊髓损伤 的实验研究 研究生 郑若昆 导师 陈风苞 郑州大学一附院 外科学(骨科)专业 郑州 450000 中 文 摘 要 脊髓损伤(SCI)是一种严重的疾患，多见于外伤后，根据北京 地区1988年回顾统计，脊髓损伤发病率为6．8例／百万人／年，低于英、 美等发达国家。近年来，脊髓损伤发病率呈上升趋势，交通事故成为 致伤首要原因。伤后出现许多并发症，给病人、家庭、社会带来沉重 的精神和经济负担。 研究发现，脊髓有一定的修复能力，保护受损的脊髓，减少神经 细胞的死亡，是康复的关键因素之一。在脊髓损伤治疗中，如何降低 脊髓继发性损伤越来越重要。继发性损伤包括神经细胞的死亡和凋 亡。凋亡可由多开中因素引起，缺血是凋亡最常见的诱因之一?细胞内 高钙、自由基也是很重要的诱因。外科手术可以减压，固定脊柱，加 强护理可以减轻并发症。如何用药物干预脊髓损伤，近年来进行了大 量的研究。新药物如：甲基强的松龙、神经节昔脂、钙离子拮抗剂、 胚胎脊髓移植、雪旺细胞移植、嗅鞘细胞移植、基因治疗。但是临床 疗效欠佳。甲基强的松龙是目前公认疗效较好的药物，但费用较贵， 长期应用有一定并发症。 已酮可可碱是非选择性磷酸二酯酶抑制剂，可以升高红细胞内的 ATP含量，缩小红细胞直径，改善血液的流动性：降低纤维蛋白浓度， 加强纤维蛋白溶解，对抗红血球聚集；激活腺苷酸环化酶活性，促进 前列环素释放，抑制血小板聚集；对抗氧自由基反应；组织钙离子内 流等作用。已酮可可碱见用于心、脑血管疾病，对脊髓损伤有否治疗 怍用，国内外尚无报道； 磷艘二酯酶抑制荆卜预大鼠继发陛脊镒损伤的实验tdf咒目的： 磷艘二酯酶抑制荆卜预大鼠继发陛脊镒损伤的实验tdf咒 目的： 观察磷酸二酯酶抑制剂(已酮可可碱)对脊髓继发性损fjj的影响， 对继发性损伤神经细胞凋亡有否治疗价值，为其临床应用提供实验依 据。 方法： 选用3—4月龄雄性SD大鼠124只，体重250 4-309，随机分为： 单纯损伤组t SCI)、损伤+甲基强地松龙组(SCI+MP)、损伤+己酮可 可碱组(SCI+PTX)。每组40只大鼠，分为4h、8h、24h、3d、7d五 个时间点，每个时间点8只大鼠。SCI+MP组腹腔注射甲基强地松龙， 剂量30mg／kg／d；SCI+PTX组腹腔注射已酮可可碱，剂量30mg／kg／d。 观测指标： (1)神经功能评价：第1d、3d、7d进行测试。以美国Tarlov法为 准。采用改良的Rivlin和Tator法，进行斜板实验。 (2)损伤脊髓含水量、离子含量测定：不同时间点，切取脊髓组织， 用Ellicot法计算组织含水量。 根据Happel法，将100mg±10 mg脊 髓标本制成样本，用原子吸收火焰光谱法测定钠、钾、钙含量。 (3)MDA、SOD含量测定：取l 00mg左右脊髓组织，用硫代巴比妥 酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)；黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧 化酶(SOD)。 (4)脊髓组织形态学改变：不同时间点，左心室一主动脉灌注4％多 聚甲醛，固定组织，切取脊髓组织1 Cm，固定后，脱水、石蜡包埋、 连续切片．切片厚3 u m，一部分行HE染色：一部分切片后，行TUNEL 染邑。统计数据用均数±标准差(X±S)表示，在SPSSl 0．0统计软 件下进行处理。检验水准：Ⅱ=O．05。 结果： 1．运动功能评价： scI+NIP组与SCI+PTx组同SCI组比较有显著的改善、P0 05)． sCl一＼lP绁与SCI—PTX组阳比差异无统汁学意义(P、”．0j)， 郑州大学2004扁研究生毕业论文2．脊髓组织含水量、离子(Na+、Ca。、K+)测定： 郑州大学2004扁研究生毕业论文 2．脊髓组织含水量、离子(Na+、Ca。、K+)测定： SCI组，脊髓组织含水量增加，K7含量下降，Na+、Ca”含量升高， 从多方面损伤脊髓。SCI+MP组与SCI+PTX组同SCI组比较组织含 水量、Na+含量下降，抑制脊髓细胞的水肿， Ca”含量下降，阻断ca。 引起的组织损伤和自由基反应，K‘含量升高，有显著差异(PO．05)； SCI+MP组与SCI+PTX组相比差异无统计学意义(P0．05)。 3．脊髓组织MDA、SOD测定： SCI组，脊髓组织MDA升高，SOD下降，说明自由基反应增强， 损伤脊髓组织：SCI+MP组与SCI+PTX组与SCI组比较脊髓组织MDA 下降，SOD升高，有效阻断部分自由基反应，保护脊髓组织，有统计 学差异(P0．05)：SCI+MP组与SCI+PTX组相比差异无统计学意义 (P0．05)。 4．脊髓组织病理、TUNEL观测