硫氧还蛋白在高氧肺损伤中的作用-儿科学(新生儿)专业论文.docx

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 硫氧还蛋白在高氧肺损伤中的作用 中文摘要 第一部分 高氧对硫氧还蛋白系统表达的影响 【目的】 建立早产新生大鼠高氧暴露肺损伤动物模型，观察高浓度氧对早产鼠 肺组织形态学影响以及硫氧还蛋白系统表达水平的变化，探讨硫氧还蛋白系统在高氧 肺损伤中的可能作用。 【方法】孕21天SD大鼠行剖腹产术，娩出的新生鼠为早产鼠。早产SD大鼠生后 d1 随机分为两组：空气组和高氧组。高氧组持续暴露于氧浓度85%的氧箱内，空气组 置于常压空气中。两组分别于空气或高氧暴露后 1、4、7、14d，10%乌拉坦腹腔注射 麻醉，提取肺组织总 RNA 和总蛋白，采取半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测硫氧还蛋白和硫氧还蛋白还原酶 mRNA 表达水平；免疫组织化学方法检测硫氧还蛋白在肺组织中的分布和表达强度； 免疫印迹法检测肺组织硫氧还蛋白蛋白水平的动态变化；同时采用HE染色观察肺组织 形态学改变，并进行辐射状肺泡计数。 【结果】① 肺组织形态学观察：空气对照组呈正常肺发育状态，高氧组肺组织 可见明显肺泡炎性改变和肺发育滞后，同时伴有辐射状肺泡计数的显著减少（p0.05）。 ② 与空气对照组比较，高氧暴露诱导了Trx、TrxR mRNA水平的显著上调，同时 Trx 蛋白水平也呈现相应的升高（p0.05）③ 免疫组织化学染色结果显示，Trx 普遍分布 于肺组织血管内皮细胞和肺泡上皮细胞胞浆内，高氧暴露组 Trx 强度较对照组增强。 【结论】 高氧暴露诱导肺组织广泛的炎症反应及肺发育落后，同时上调肺组织 Trx、TrxR 表达水平。Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病机制中发挥 重要保护作用。 【关键词】 高氧；早产；硫氧还蛋白；肺损伤 第二部分 硫氧还蛋白对高氧暴露胎鼠肺泡上皮细胞的保护作用 【目的】 观察补充外源性硫氧还蛋白对高氧诱导的胎鼠肺泡II型上皮细胞损伤的 影响，探讨硫氧还蛋白可能的作用机制。 【方法】无菌分离、培养胎鼠肺泡II型上皮细胞。随机将细胞分为单纯高氧暴露 组和重组人硫氧还蛋白（recombinant human thioredoxin, rhTrx）处理组，两组同时暴 露于氧浓度95%的高氧环境。两组分别于高氧暴露 0、12、24、48h，MTT 法检测细 胞活力情况；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS) 的生成；超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性分别由其相应的酶 活性检测试剂盒进行测定；免疫印迹 蛋白检测法测定丝裂原激活蛋白激酶 （ mitogen-activited protein kinase ， MAPK ）和磷脂酰肌醇（ 3 ）激酶 - 蛋白激酶 (phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt) 信号通路活性。 【结果】与单纯高氧暴露组细胞比较，① rhTrx 处理显著减轻了高氧诱导的肺 泡上皮细胞的死亡，提高了细胞活力；② rhTrx 显著降低了细胞 ROS 的水平；③ rhTrx 显著提高了锰型超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性； ④ rhTrx 激 活了细胞外信号调节激酶1/2 （extracellular signal regulated kinase，ERK1/2) ERK1/2 和 PI3K 活性，而抑制了c-Jun N末端激酶1/2（c-Jun N-terminal protein kinase，JNK1/2) 和P38丝裂原活化蛋白激酶（P38mitogen-activited protein kinase，p38）的活性。 【结论】 硫氧还蛋白通过减少细胞内 ROS 的生成、提高抗氧化酶活性、调控 MAPKs和 PI3K-Akt信号通路对高氧暴露胎肺泡上皮细胞发挥保护作用。 【关键词】 支气管肺发育不良；高氧；丝裂原活化蛋白激酶；磷脂酰肌醇（3） 激酶-蛋白激酶；活性氧 第三部分 硫氧还蛋白在高氧暴露早产鼠肺损伤中 作用的相关机制研究 【目的】 建立早产新生鼠高氧暴露肺损伤动物模型，观察外源性 Trx 对高氧暴露早产鼠肺损伤的作用 ，并探讨 Trx 的可能作用机制 ，为高氧肺 损伤的防治 寻找新的靶点。 【方法】 孕 21 天 SD 大鼠行剖腹产术，娩出的新生鼠为早产鼠。早产鼠生后 d1 随机分为 3 组：① 空气对照组，简称空气组；② 单纯高氧暴露组，简称高氧组； ③ Trx 干预+高氧暴露组，简称 Trx 干预组。空气对照组置于室温空气中；