泪腺肿瘤RASSF1A基因表达异常及临床意义的研究-眼科学专业论文.docxVIP

，J。 ，J。 ■，， 郑州大学2007届顾l‘学位论文 中文摘要 织学检查表现正常者及丌放性眼眶损伤患者所切除的损伤部位泪腺共lO例，分 为泪腺J下常组织组。 2实验方法 取各组标本0．2克离体半小时内，立即置入液氮罐速冻，然后保存于一80℃ 冰箱中备用。用RT-PCR检测泪腺肿瘤组织及正常泪腺组织中RASSFlAmRNA 的表达，比较其差异性，即取0．1克标本提取其组织中的总RNA，并通过电泳和 紫外线分光光度仪鉴定总RNA的完整性及纯度。对mRNA定量后进行RT-PCR 扩增，以13-actin(p．肌动蛋白)作为内参照。RT-PCR扩增产物进行电泳分离， 应用凝胶成像系统观察电泳cDNA条带，并使用凝胶成像分析软件对结果进行相 对定量分析。同时采用Westernblot方法检测RASSFlA基因的蛋白半定量表达 情况，提取组织中的总蛋白，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，半干转转膜封闭， 一抗鼠抗人RASSFlA抗体孵育，二抗羊抗鼠IGg抗体孵育，DAB显色试剂盒 显色。 3观察项目与指标 RT-PCR结果以mRNA指数(RI)作为表达水平参数，即RASSFlARI=RAS． ·SFlAmRNA／p-actinmRNA，以工±s记录实验结果。Westernblot结果根据显色 条带的强弱，记录阴性表达和阳性表达的例数，统计结果。 4统计学分析 采用SPSSll．0软件系统进行分析，计量资料采用独立样本t检验，计数资 料采用Fisher’精确检验。判定标准为P0．05为有统计学差别。 结果 1 RT-PCR结果 1．1各组RASSFlA校正值 正常泪腺组织、良性肿瘤组织以及恶性肿瘤组织中RASSFlA校正值 (RASSFlA／p．actin)分别为0．4240d：0．1890、O．2943士0．1605、0．0810士0．0595。 1．2正常泪腺组织组与良性泪腺肿瘤组织组比较 良性肿瘤组织与正常泪腺组织相比，RASSFlA mRNA水平差异有统计学意 义，良性肿瘤组织中RASSFIA基因转录水平明显低于正常组织(卢3．703，尸 0．05)。 1．3正常泪腺组织组与恶性泪腺肿瘤组织组比较 II 郑州人学2007届硕士学位论文 郑州人学2007届硕士学位论文 中文摘要 恶性肿瘤组织与正常泪腺组织相比，RASSFIAmRNA水平差异有统计学意 义，恶性肿瘤组织中RASSFlA基因转录水平低于正常组织(t=18．222，PO．05)。 1．4良性泪腺组织组与恶性泪腺肿瘤组织组比较 良性肿瘤组织与恶性肿瘤组织相比，RASSFlA mRNA水平差异有统计学意 义，恶性肿瘤组织中RASSFlA基因转录水平低于良性肿瘤组织(卢11．331，尸 0．05)。 1．5结合临床资料和随访结果分析RASSFIA mRNA的表达值与泪腺肿瘤复发 的关系 良性肿瘤组中1例mRNA的表达值为RI=O．1030(接近恶性肿瘤的表达量)， 术后复发。恶性肿瘤组中，1例RASSFlA的mRNA的表达值为RI-O．3095(处于 泪腺良性肿瘤组织的表达量区间)，无术后复发史，其余9例RASSFlA的mRNA 表达值位于0．0810i-0．0595区间，l例术后无复发，2例复发，6例随访丢失。 2 Western blot结果 2．1各组蛋白表达结果 正常泪腺组织、良性泪腺肿瘤组织及恶性泪腺肿瘤组织均可检测RASSFlA 蛋白，正常泪腺组织全部RASSFlA蛋白表达呈现强阳性(+++)，良性泪腺肿 瘤组织1l例呈强阳性表达，4饼呈中度阳性表达，6例呈弱阳性表达；恶性泪腺 肿瘤组织1例呈强阳性表达，2例呈中度阳性表达，7例呈弱阳性表达。恶性泪 腺肿瘤组织中RASSFlA蛋白的表达程度明显低于良性泪腺肿瘤组织，组间比较 具有显著性差异(P0．01)。 2．2结合临床资料和随访结果分析RASSFlA蛋白表达与泪腺肿瘤复发的关系 良性肿瘤组中1例RASSFlA蛋白表达弱阳性，术后复发。恶性肿瘤组中，1 例蛋白表达强阳性，无术后复发史，其余9例RASSFlA蛋白表达阴性者中，l例术 后无复发，2例复发，6例随访丢失。 结论 l RASSFlA mRNA水平在正常泪腺组织中较高，良性泪腺肿瘤组织中稍低，恶 性泪腺肿瘤组织中更低，三者之间两两比较，差异均有统计学意义。正常泪腺组 织、良性泪腺肿瘤组织及恶性泪腺肿瘤组织均可检测出RASSFIA蛋白，但蛋白 表达强弱不同，三者之间两两比较，差异亦具有统计学意义。 2良、恶性泪腺肿瘤组织中RASSFIA基因在转录水平和蛋白表达水平上均低于 H1 郑州大学2007届硕I：学位论文 郑州大学2007届硕I：学位论文 中文摘要 泪腺正常组织(P0．05)，RASSFlA基因参与了泪腺肿瘤的生长分化，可以阻止 正常泪腺组织中细胞