链霉菌发酵生产磷脂酶及酶解大豆卵磷脂的条件的优化-微生物学专业论文.docxVIP

摘要大豆磷脂是从大豆中提取的含磷的脂类物质的混合物，由于其独特的理化材： 摘要 大豆磷脂是从大豆中提取的含磷的脂类物质的混合物，由于其独特的理化材： 质，在食品工业中的应用已有很长的历史。现在国内外市售的卵磷脂主要是以大豆 磷脂为主。虽然磷脂作为乳化剂，已广泛应用于食品、医药、化妆品、皮革、涂料 等领域，但普通大豆磷脂亲水性不够理想，使大豆磷腊的应用受到了限制。 解决此难题的方法之一就是对磷脂进行改性，提高磷脂的亲水性。改性方法包 括物理改性、化学改性和酶法改性。由于前两种方法存在着一些安全性等方面的缺 陷，已逐渐被淘汰。酶法改性是利用磷脂酶裂解磷脂分子中的脂肪酸基团使之转化 成为溶血磷脂，与普通磷脂相比。溶血磷脂在乳化、抑菌等方面的性能均有明显改 善。磷脂的酶法改性具有反应条件温和，速度快，进行完全，副产物少等特点，作 为～种绿色、环保的方法有着广泛的发展前景和重要的经济和社会价值。 为了能够利用微生物发酵，大量生产PLA2并应用予生产，本实验室李维琳老 师从紫红链霉菌(Streptomyces violaceoruber)中克隆出PLA2的基因并将其在异源 宿主中进行表达，构建PLA2的高产菌株。本实验是在上述工作的基础上进行的， 先发酵该高产菌株制备磷脂酶，并用磷脂酶对大豆磷脂进行水解，采用静态水浴反 应对酶解工艺进行了系统研究。优化出链霉菌发酵产酶和酶水解大豆磷脂的最佳条 件，为溶血磷脂的工业化生产奠定了重要的实验室基础。本论文完成了下述研究：【 作： 利用重组变铅青链霉菌发酵来制备磷脂酶A2。对一些发酵参数进行了摸索，浚 菌株的最佳摇瓶发酵条件为：培养基(黄豆饼粉)浓度2％、培养基起始pH值8．0、 接种量5％、装瓶量100 ml培养基／250 ml三角瓶．接种后55 h左右酶的活力达到 0．95 IU／ml。 以大豆磷脂为底物，发酵得到的磷脂酶A2为工具酶，采用静态水浴反应的方 式，进行了酶改性研究。大豆磷脂的最佳水解工艺条件为：底物浓度为4％，酶浓 度为0．10 IU／ml，反应温度30℃，起始pH值7．5，ca2+浓度O．03％，反应时间1l h。 在最佳反应条件下，得到的产物经酸碱滴定法及HPLC检测，大豆磷脂的转化率为 86|30％。 测定溶血磷脂乳化能力的最佳条件为；乳化剂的添加量为50mg溶m磷脂／30ml 油，乳化2min，乳化能力能达到354ml油／g磷脂。 关键词：变铅青链霉菌发酵磷脂酶A2大豆卵磷脂 AbstractIn Abstract In this text，the hydrolysis was studied by using the natural soybean phospholipid substrate and first with phospholipase A2 produced by Streptomyces lividans 1 326．The factors，such as technology of enzyme hydrolysis phospholipids，activities of emulsification of lysophospholipid，had been discussed with emphasis．The modified phospholipid has agood stability ofemulsion with high salt and over a wide range ofpl{． As an additive in food．it prevents unwanted colorization of fi)od or contamination with microbial spore，and plays role in taste by coating bitter taste substances．As good emulsifier，it enhances emulsion stability and increases solubility ofhydrophobic drugs well as hydrophilic compounds in oil phase．As mild detergent and anti—fungal agent， lysophospholipid call be also used in protein purification and in agrochemicals， respectively．So the study of enzyme-modified phospholipid is very significant work． The results offered impor