散发性结直肠癌发生及转移相关基因定位及外周血癌细胞富集分析-外科学专业论文.docxVIP

摘要目的： 摘要 目的： (1)为了全面了解2号、5～18号染色体上结直肠癌相关的抑癌基 Ⅲ缺失情况，寻找与肿瘤发生及转移相关的位点，筛选可能的抑癌基因，对83 例散发性结直肠癌进行等位基因的杂合缺失分析。(2)用磁激活细胞分选技术富 集并分离结直肠癌患者外周血循环中的肿瘤细胞，探讨其对肿瘤转移诊断和治疗 的意义。方法：(1)用2号、5～18号染色体上269个多态性微卫星标记引物(平 均距离为8．8cM)对83例散发性结直肠癌患者基因组DNA扩增相应的微卫星 位点，用ABI PRISM 377测序仪进行基因扫描，统计各位点杂合缺失率，以及 仡不同分化、分期肿瘤间的差异。(2)手术前抽取21位结直肠癌患者和9位对 照者的外周血，标记带磁珠的细胞角蛋白(CK)抗体，经磁柱富集CK+上皮细 胞，用流式细胞便检测其含量，并比较患者组与对照组以及不同Dukes分期之间 CK+含量的差异。结果： (1)在研究的269个微卫星标记中，217个获得有效 数据，16个位点杂合缺失率超过35％，集中分布于18q、17p、5q；15个位点的 杂合缺失率与肿瘤的分化或淋巴结转移程度相关。(2)在未经磁激活细胞分选技 术富集的标本中均未发现CK+CD45一细胞；在经富集的标本中其含量在对照组 与患者组问以及Dukes A—B期与Dukes C．D期患者间差别有非常显著的意义7讨 论：(1)18q、170、5q区域性的杂合缺失以及另一些位点相对独立的杂合缺失 对结直肠癌发生起重要作用，其中多个位点尚无已知的肿瘤相关基因。(2)包括 2号染色体上两个区域在内的15个位点在不同分期、分化的肿瘤间存在显著差 异，可能与肿瘤转移潜能相关。(3)磁激活细胞分选技术能有效地富集上皮来源 细胞，并能反映外周组织中癌细胞数量：其多少与结直肠癌的存在及临床分期密 切相关，对判断肿瘤转移、预后及化疗疗效有指导意义。) 关键词： 杂合缺失；微卫星位点；劬椎i环性肿瘤细胞；磁激活细胞分选； 流式细胞仪；结直肠癌 知 ／ AbstractObjectives(1)In Abstract Objectives(1)In an attempt to integrally investigate the loss of tumor suppressor gene and search putative suppressor loci associated with tumor occurrence or progressing on chromosome 2 and chromosome 5-18，a genomic-wide allelic analysis was conducted，using 83 tumors from Chinese sporadic colorectal cancer patients．(2) The significance of MACS(Magnetic activated cell sorting)was studied for diagnosing and treating cancer metastasis by enriching and quantifying peripheral circulative carcinoma cells in colorectal cancer patients．Methods(1)We employed 269 microsatellite marker primers to amply the corresponding loci of the genome DNA，and the PCR products electrophoresed on a 377 PRISM sequencer and the fluorescent signals were analyzed by Genotyper and Genescan software．The LOH frequency of the loci，and the difference between high differentiated adenocarcinoma and low one or between patients with lymph node metastasis and not were analyzed by SPSS．(2)Blood samples，preoperatively collected from 21 patients with colorectal cancer and 9 health volunteers，were labeled by anti-cyt