转宿主粘虫颗粒体病毒（PuGV－Ps）增效蛋白-中国科学院动物研究所.PDFVIP

29(3)389-394 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2013 年 8 月 转宿主粘虫颗粒体病毒（PuGV －Ps） 增效蛋白基因的克隆表达及活性 1* 2 1 3 1 徐 健 ，赵 松 ，刘 琴 ，杨 青 ，李传明 （1. 江苏里下河地区农业科学研究所，扬州 225007 ；2. 江苏省血吸虫病防治研究所，无锡 214064 ； 3. 中国科学院动物研究所，北京 100101 ） 摘要： 以东方粘虫为转宿主增殖的颗粒体病毒（PuGV−Ps ）DNA 为模板通过PCR 反应扩增出一条2.7 kb 的特异性基因片段，纯化的PCR 产物克隆到载体质粒pET−15b 中，构建重组质粒pET−15b−En ，重组质粒 外源基因测序证明PCR 扩增产物是粘虫颗粒体病毒转宿主病毒PuGV−Ps 增效蛋白的全长基因。与原始美 洲粘虫颗粒体病毒（PuGV ）增效蛋白基因的序列比较，两者同源性达99.59%。11 个突变碱基中有7 个集 中在 5′端下游 500 bp ，而 3′端上游 500 bp 仅 1 个碱基发生突变。PuGV−Ps 增效蛋白基因重组质粒 pET−15b−En 转化到大肠杆菌中构建重组菌，在IPTG 诱导下表达了 108 kD 的表达产物，Ni2+柱纯化证明 表达产物是目标增效蛋白。LB 培养液中加入0.2% 的葡萄糖后有利于增效蛋白基因的表达。生物测定结果 表明，粗提的表达产物具有增效活性，可以提高Bt δ−内毒素对棉铃虫、甜菜夜蛾的敏感性。 关 键 词：转宿主粘虫颗粒体病毒；增效蛋白；克隆表达；生物测定 中图分类号：S476.13；Q785 文献标识号：A 文章编号：1005-9261 (2013)03-0389-06 Expression of Enhancin Gene from Pseudaletia unipuncta granulovirus-Ps in Escherichia coli and Bioassay of Its Activity 1* 2 1 3 1 XU Jian , ZHAO Song , LIU Qin , YANG Qing , LI Chuanming (1. Jiangsu Lixiahe Institute of Agricultural Science, Yangzhou 225007; 2. Jiangsu Institute of Parasitic Disease, Wuxi 214064; 3. Institute of Zoology Chinese Academy of Science, Beijing 100101, China) Abstract: Using the DNA from PuGV-Ps (Pseudaletia unipuncta granulovirus propagated in the larvae of P. separata) as template, a 2.7 kb specific fragment was amplified by PCR reaction. Purified PCR product was cloned into plasmid pET-15b and a recombinant