桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究-特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究中文摘要 桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究 中文摘要 本实验用蒸馏水提取桑叶中的DNJ，然后再过阳离子交换柱层析对DNJ进 行初步纯化，最后用分光光度法测定桑叶中DNJ的含量，并比较了不同pH段收 集的桑叶样品中的DNJ含量，以及不同处理方法、不同采收时期、不同叶位的 桑叶样品中DNJ的含量。结果表明，用分光光度法测量桑叶中的DNJ含量是可 取的，不同pH段、不同处理方法、不同采收时期，不同叶位的桑叶样品中DNJ 的含量有一定差别。试验研究共分七部分： (1)DNJ的分光光度法测定 选定DNJ的特异吸收波长是利用分光光度法测定桑叶中DNJ含量的必要条 件。DNJ本身无紫外或可见光吸收，必须加入一种显色剂使DNJ显色才可。本 试验选用碘一碘化钾试液作显色剂，DNJ标准品加显色剂后，以水+显色剂作空 白对照，在300nm～450nm下测定不同波长对应的吸光度，得到一吸收光谱曲线。 根据吸收光谱曲线及Lambert．Beer定律，确定DNJ特异吸收波长为334nrn。 将DNJ标准品配成0．1mg／ml的标准溶液。DNJ按不同的浓度梯度分别加入 试管中，再加入显色剂和水，混匀。以水+显色剂作为空白对照，在334nm下 测量各个试管中溶液的吸收值。以DNJ标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸 收值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，在一定的DNJ浓度范围内，溶液的 吸光度与DNJ浓度呈正比关系，符合Lambert．Beer定律，可用分光光度法测量 桑叶中DNJ含量。 (2)桑叶DNJ的提取 称取609干燥桑叶(含水率9．8％)，放入蒸馏烧瓶中，加入蒸馏水，加热回 流提取2小时，倒出提取液。二次提取后，合并两次提取液，并进行过滤。将滤 液进行加热浓缩至一定体积，即得到桑叶DNJ的提取液。 (3)桑¨|J DNJ的纯化 将桑叶DNJ的提取液过阳离子交换柱进行DNJ的纯化。即经树脂处理，装 柱，上柱，洗脱收集，浓缩，干燥等步骤得含DNJ的桑叶提纯物。该提纯物为 淡棕黄色粉末。(4)桑叶DNJ样品中不同pH段DNJ含量的测定 淡棕黄色粉末。 (4)桑叶DNJ样品中不同pH段DNJ含量的测定 在桑叶提取液过阳离子交换柱纯化DNJ后，按收集液的不同pH段分别收集、 干燥，配成溶液后，测定其中的DNJ含量。结果表明，pH9．4～10．5的收集液中 含有DNJ，桑叶中含量为O．024％，桑叶提纯物中DNJ含量为2．22N，为桑叶中 含量的近10倍，而其他两个pH段(Ph3～7和Ph7～9．4)的收集液中几乎不含 DNJ。 (5)纯化前后桑叶DNJ含量的比较 取两份桑叶，一份只用水进行回流提取而不进行纯化，另一份既用水提取又 过阳离子交换柱进行纯化。收集物干燥后，将得到的纯化前后的桑叶样品配成溶 液，测定桑叶和提纯物中DNJ含量。结果表明，纯化前的桑叶中DNJ含量略高 于纯化后的桑叶，而纯化前的桑叶提取物中DNJ含量明显低于纯化后提纯物中 DNJ含量。 (6)不同季节的桑叶DNJ含量的差异 将春季和秋季采摘的桑叶分别用水提取后，将提取液过阳离子交换柱进行纯 化，收集液冷冻干燥后，将两份干燥物配成溶液，分别测定桑叶和提纯物中DNJ 含量。结果表明，秋季桑叶和提纯物中DNJ含量均高于春季桑叶和提纯物中DNJ 含量。 (7)不同叶位桑叶中DNJ含量的差异 将秋季桑叶的上位叶和下位叶分别用水提取后，将提取液过阳离子交换柱进 行纯化，收集液冷冻干燥后，将两份干燥物配成溶液，分别测定桑叶和提纯物中 DNJ含量。结果表明，桑叶上位叶和提纯物中DNJ含量均明显高于下位叶和提 纯物中DNJ含量。 本试验结果表明，用分光光度法可以测定桑叶中DNJ含量，从不同的桑叶中 DNJ含量的比较结果看，不同的桑叶中DNJ含量有一定差异，进行桑叶中DNJ 提取时为得到较多DNJ，以选用秋季上位叶为好，且在开发桑叶产品时，用桑叶 提纯物比直接用桑叶作原料更有实用价值。 关键词： 桑叶DNJ 分光光度法 离予交换树脂纯化 The The Studies on the Extraction，Purification and Content Determination of DNJ from Mulberry Leaves Abstract DNJ was obtained from mulberry leaves extracted with distilled water in this experiment．The DNJ was purified through cation exchanger column chromatography． The content of DNJ in mulberry leaves was determin