动物细胞制药工程.pptVIP

产品纯度 产品生物活性 产品比活性：每毫克蛋白质中含有多少单位生物学活性（U/mg） 产品蛋白质性质的鉴定 产品中杂质的检测 产品的稳定性 产品临床前的安全性和有效性评价 产品临床试验的安全性和有效性评价 对产品的质量要求： 一、改进表达载体，提高表达水平和产量 二、利用代谢工程，改进培养工艺，降低生产成本 三、抑制细胞凋亡，延长培养周期 四、采用糖基化工程，提高产品质量 五、转基因动物的研究 六、组织工程的研究 第九节 动物细胞制药的前景与展望 一、改进表达载体，提高表达水平和产量 采用更强的启动子和增强子 更好的利用扩增系统或寻找高表达位点 采用和改造更好的宿主细胞 二、利用代谢工程，改进培养工艺，降低生产成本 采用代谢工程改造工程细胞 代谢工程，即采用基因工程的手段，使工程细胞增加或减少某种酶，改造它的代谢能力和途径，使其降低对某些营养物质的需要，减少某些代谢产物的产生和危害，以及控制工程细胞的增殖速度和制造产品的能力。 改进培养工艺，降低生产成本 优化培养工艺 三、抑制细胞凋亡，延长培养周期 细胞凋亡：一种由遗传基因决定的程序性细胞主动死亡 防止细胞培养过程中细胞凋亡的三种措施：①通过培养基和氧的优化供应防止营养和氧的缺乏；②用化学添加剂如抗氧化剂等阻断细胞凋亡过程；③采用抗细胞凋亡基因改造工程细胞 四、采用糖基化工程，提高产品质量 蛋白质有两种糖基化方式：N-糖基化和O-糖基化。O-糖链对蛋白质特性影响不大，N-糖链的不同对产品可产生较大的影响。 糖基化工程：用基因工程的手段，人为的改变肽链结构、增加某些酶基因以及改进和控制某些培养条件等，以达到正确糖基化的目的。 五、转基因动物的研究 1982年Palimiter等首次提出用转基因动物来生产药用蛋白。现有α1-抗胰蛋白酶、抗凝血酶Ⅲ和蛋白C等多种产品。 优点：质量高、成本低、产品质量基本上与天然的一样 六、组织工程的研究 组织工程：通过对细胞的大量培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工构成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管和人造骨等，并用于临床治疗。 思 考 题 动物细胞的生理特点 动物细胞大规模培养的方法 微载体需具备哪些条件？ 动物细胞培养的操作方式 动物细胞生物反应器的类型 中空纤维培养器优点 （3）结团培养 利用细胞本身作为基质，相互贴附后，再用悬浮的方法培养，可获得高密度的细胞。 优 点：操作简便，节省了用于微载体的成本。 二、动物细胞培养的操作方式 分批式操作 补料-分批（或流加式）操作（细菌生产中常用） 半连续式操作 连续式操作（个别情况下用于悬浮细胞的培养） 灌流式操作 1、分批式操作 将细胞和培养基一次性加入反应器内进行培养，此后细胞不断增长，产物不断形成和积累，最后将条件培养基，即经培养已含有细胞产物的培养基，或连同细胞一并取出，培养结束。 先将细胞和培养基加入反应器，待细胞生长至一定密度后，向反应器内加入诱导剂或病毒等，经一段时间作用后，将反应物取出。 2、半连续式操作 定义：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物，或单纯是条件培养基，或连同细胞、载体一起，然后补充同样数量的新鲜培养基，或另加新鲜载体，继续培养。 优点：操作简便，生产效率高，可长期进行生产，反复收获产品，而且可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。 3、灌流式操作 定义：当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时不断地补充新鲜培养基。但细胞留在反应器内，使细胞处于一种不断的营养状态。 细胞可处在较稳定的良好的环境中，营养条件好，有害代谢废物浓度低； 可极大地提高细胞密度，从而极大地提高了产品产量； 产品在罐内停留时间缩短，可及时收留在低温下保存，有利于产品质量的提高； 培养基的比消耗率较低，加之产量质量的提高，生产成本明显降低。 灌流式操作的优点 一、动物细胞生物反应器的类型 二、动物细胞生物反应器的检测控制系统 三、培养条件的控制 第七节 动物细胞生物反应器 生物反应器必备条件 制造生物反应器所采用的一切材料，尤其是与培养基、细胞直接接触的材料，对细胞必须是无毒性的 生物反应器的结构必须使之具有良好的传质、传热和混合的性能 密封性能良好，可避免一切外来的不需要的微生物的污染 对培养环境中多种物理化学参数能自动检测和调节控制，控制的精确度高，能保持环境质量的均一 可长期连续运转 容器加工制造时要求内面光滑，无死角，以减少细胞或微生物的沉积 拆装、连接和清洁方便，耐高压蒸汽消毒，便于操作维修 设备成本尽可能低 生物反应器必备条件 按规模大小可分为： 实验室规模：＜20L，用于培养工艺的研究;