整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析杨丽萍伊茂礼阎志勇.docVIP

整合子在鲍曼不动杆菌中的分布与结构分析杨丽萍伊茂 礼阎志勇 杨丽萍伊茂礼阎志勇(山东省青岛大学医学院山东青岛266000) R37 A 1672-5085 (2012) 6-0007-03 FI的了解我院临床分离的鲍曼不动杆菌的整合子携带情况，以及整合 子与鲍曼不动杆菌的耐药相关性分析。方法 用VITEK2 Compact全自动微生物 分析系统及纸片扩散法检测临床分离的鲍曼不动杆菌对常用22种抗生素的敏感 性。PCR扩增整合酶基因检测鲍曼不动杆菌携带整合子情况，同时对整合子可变 区进行扩增及测序以其了解整合子耐药基因盒携带耐药基因的情况。结果 鲍曼 不动杆菌呈多重耐药性。鲍曼不动杆菌对CPZ/SB耐药率为1.2%,对替加环素 (15?4%)、左旋氧氟沙星(34.4%)、亚胺培南(54.3%)、比阿培南(49.4%)、阿 米卡星(59%),对其他抗生素均在71%以上。104株中有73株菌株含I类整合 子 邙时生率为70.2%),未有II、III类整合子扩增阳性菌株，且I类整合子阳性 株的耐药性均高于阴性株。I类整合子基因盒序列分析表明我院鲍曼不动杆菌I 类整合子携带aacA4. catB8和aadAl 3种耐药基因。结论 我院分离的鲍曼不动 杆菌主要携带I类整合子，且与多重耐药性密切相关。 关键词 鲍曼不动杆菌整合子整合酶多重耐药性 鲍曼不动杆菌导致的多种感染流行或爆发的医院感染在过去10年里已 在世界各地包括国内广泛报道，尤其引起医药及微生物学界等的关注［1］。鲍曼 不动杆菌已经是常见的医院内感染非发酵革兰阴性杆菌。对几乎各类化学结构各 异的临床常用抗生素呈现高度的天然固有耐药性和获得性耐药性使其感染的药 物治疗选择极其有限［2, 3］鲍曼不动杆菌引起的院内感染及耐药发展趋势值得 我们高度关注，为了解我院鲍曼不动杆菌中整合子的分布情况及耐药性，对我院 2009年4月至2010年1月临床收集的104株鲍曼不动杆菌进行耐药分析及整合 子检测与序列分析，进一步探讨整合子与鲍曼不动杆菌耐药关系。 1材料和方法 1.1菌株来源 收集烟台毓璜顶医院2009年4月?2010年1月住院患 者送检标本中分离的鲍曼不动杆菌共104株，菌株均经法国梅里埃公司vitek2 Compact全自动微生物分析鉴定系统鉴定。质控菌为大肠埃希菌ATCC 25922,产 酸克雷伯菌700630o 1.2试剂 抗生素药敏纸片、M-H琼脂、肉汤培养基、琼脂糖均购自英 国 0X0ID 公司；2times;TaqPCRMasterMix DNA sizemarker II 2500bpDNAsizemarker均购于北京天坛生物科技公司；内切酶Rsa和Hindi均购 于大连TAKARA公司；引物合成及PCR产物测序由上海英俊公司完成。 1.3药敏试验 菌株均经法国梅里埃公司vitek2 Compact全自动微生物 分析系统革兰阴性菌鉴定卡(GN)鉴定，药敏为GN13药敏卡MIC法检测22种 药物(氨茉西林、氨茉西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他卩坐巴坦、头范哌酮/ 舒巴坦、头泡咲辛、头抱畔林、头孑包他卩定、头孑包曲松、头抱毗月亏、头砲替坦、头 砲噬利、亚胺培南、比阿培南、替卡西林/克拉维酸、阿米卡星、妥布霉素、庆 大霉素、替加环素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明)的敏感性；质控菌为 产酸克雷伯菌700630,大肠埃希菌ATCC 25922o 1.4细菌处理 挑取纯培养菌落于含有750ul超纯水的离心管内并充分 混匀，95°C水浴20min后，再?20°C冰浴lOmirio最后20000r/min离心4min,收 集上清液，?20°C冰箱备用。 1.5整合子及及整合子可变区相关耐药基因盒的扩增PCR反应体系为 20mu;l, 2times;Taq PCR MasterMixlOmu;l, 1mu;IDNA 模板，lOpmol/L 引物 各lmu;l,灭菌双蒸水7mu;L反应条件94°C预变性5min；循环参数为94°C 变性lmin, 56°C退火30s, 72°C延伸lmin,共30个循环,最后72°C延伸7min 结束。用含澳乙喘的2%琼脂糖凝胶电泳分析。对整合酶阳性菌株再进行整合子 可变区的扩增，扩?增整合子可变区循环参数94°C变性4min95°C30s 47°C40s72°C 2min30个循环。最后72°C延伸10mino用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物, 凝胶成像系统观察电泳结果，并照相。 1.6 酶切分析 取 10times;Hbuffer2ub 10U / ul 的内切酶 Hinf I 和 Rsa 各lul,整合子可变区PCR扩增产物8uLdsH2O8u 37°C水浴4h,酶切产物用含EB的 2%琼脂糖凝胶电泳分析。 1.