染色体病快速产前诊断技术的研究进展.docVIP

染色体病快速产前诊断技术的研究进展 大庆医学高等专科学校163453 【摘 要】染色体病是由于染色体数目或结构畸变而引起的疾病，目前尚无有效 的治疗方法。产前诊断是防止染色体病患儿出牛的有效方法。为了快速、准确的 诊断染色体病，一系列的分子细胞遗传学技术如荧光原位杂交（FISH）、定量荧 光聚合酶链式反应（QF-PCR）、多重连接依赖探针扩增（MLPA）、微阵列比较基 因组杂交（aCGH）等被广泛应用于产前诊断。木文主要对这些技术在染色体病 快速产前诊断中的研究进展做一综述。 【关键词】染色体病；快速产前诊断；研究进展 【中图分类号JR714.5【文献标识码】A【文章编号］2096-0867 （2016） 12-189-02 产前诊断乂称宫内诊断，是指在遗传咨询、诊断基础上，对高风 险和严重危害性的胚胎或胎儿，在出牛前对可识别的遗传性疾病进行检测，最大 限度减少遗传病的出现，做出准确诊断［1］。产前诊断的范畴包括染色体病、单 基因病、多基因病以及各种环境致畸因子所致的先天畸形。其中染色体病是由于 染色体异常所引起的一类遗传性疾病，在新牛儿中发病率约占0.5%。传统的产 前诊断方法是对羊膜腔穿刺获得羊水细胞或是绒毛抽吸获得的绒毛细胞进行培 养，对染色体有丝分裂期的核分裂相进行核型分析，从而准确地诊断各种染色体 数目和结构异常。但是常规的染色体核型分析方法存在细胞培养时间长、易受培 养条件限制、技术难度大等局限性。随着分子细胞遗传学技术的迅速发展，更快 速、高效的分子产前诊断技术正在逐渐应用于临床。木文就目前临床应用最广泛 的荧光原位杂交（FISH）、定量荧光PCR技术（QF?PCR）、多重连接依赖探针扩增 技术（MLPA）、微阵列比较基因组杂交（aCGH）等技术的研究进展做一综述。 1 荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH） FISH 技 术是细胞遗传学、分子牛物学及免疫学相结合的基础上发展起来的一种新技术。 1992年Klinger等⑴首次硏究报道使用FISH技术对未培养的羊水间期细胞进行了 染色体非整倍性异常检测，将产前诊断时间缩短到24~28h。FISH技术的基本原 理是采用特殊荧光标记的DNA序列探针与样本DNA杂交后，在荧光显微镜下观 察荧光杂交信号来检测样本的数目和结构异常。FISH技术与传统的核型分析方法 相比，被检测的样本并不局限于羊水细胞和绒毛细胞，还可以是胎儿有核红细胞 或单个卵裂球细胞等[2-5]o检测的样本无需进行细胞培养，间期细胞也可以用于 杂交分析，并口具有特异性好，灵敏度高的特点，在获取样本l~2d后即可出结 果，比核型分析所需的10-14d 间明显缩短。大量的研究证明，FISH商品化试 剂盒用于间期核检测，敏感性和特异性均较高[6]。 但FISH技术也有一定的局限性，因受特异性探针的限制，只能检测已 知的染色体异常，仅仅能提供有限的染色体信息，目前该技术在临床主要用于检 测13、18、21、X和Y等最常见的染色体数目异常；由于一?种探针往往只能检测 岀一种异常，对同吋存在多种异常染色体需采用多个探针进行检测，将增加检测 成本；FISH对相互易位等染色体结构异常无法检岀，这是由于断裂点的不可预见 性很难制备适宜的探针；FISH还存在一定的假阴性率和假阳性率，嵌合体及母体 细胞污染等问题也无有效的解决方法⑺。因此，FISH技术不可能完全代替常规 染色体核型分析，当FISH结果不确定时，还需要与经典的核型分析相结合对染 色体病进行产前诊断。 2.定量荧光聚合酶链式反应(quantitative fluorescent polymerase chain resetion, QF-PCR) QF-PCR是将荧光能量传递技术应用于PCR中，利用荧光引物对染色体上特异的 短串联重复序列进行扩增，不同的染色体上STR位点的序列因碱基重复数不同导 致扩增片段长短不同，经毛细管电泳即可进行判断。QF-PCR不需要细胞培养， 操作相对简便，省吋省力，24h即可出结果，消除了 95%夫妇等待核型分析结果 所造成的焦虑[8],并且在产前诊断中具有敏感性、准确性高的优点。通过扩增 非多态的Amelogenin基因(AMXY),该位点可在X、Y染色体上扩增出长度不一 的特异性片段，可检测胎儿性染色体数目异常(如47, XXY； 47, XYY； 48, XXXY) [9-10]o QF-PCR产前诊断的成本较低 可同时检测人批标本，已在很多产前诊断 中心常规应用，特别是在欧洲地区。 但是QF-PCR也存在自身局限性，如只能检测多个拷贝的基因位点的有 无，而无法检测具体的拷贝数的改变，而且需要找到多个位点进行复合扩增，才 能保证检测结果的准确性。另外，即使检测结果正常