山核桃幼胚不同发育时期DNA甲基化水平和模式的研究-森林培育专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，在指导教师指导下，通过我的努力取得的成 果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的 地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江林学院 或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的 同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产 权的行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 论文使用授权的说明 本人完全了解浙江林学院有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交 论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容， 可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。□ 不保密, 本学位论文属于不保密。 □ (请在方框内打“√”) 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 指导教师亲笔签名： 日 期： 摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘要 DNA 甲基化修饰在动植物基因组中普遍存在，是一种重要的表观遗传学表 现形式。在植物中，DNA 甲基化修饰参与基因组所有功能，包括转录、复制、 DNA 修复、基因重排和细胞分化等，DNA 甲基化对植物基因组防御、调控基因 表达以及控制植物的生长和发育中起重要作用, 对植物本身有着积极的意义。 本研究利用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）分子标记技术对山核桃幼胚 生长发育的不同时期基因组总 DNA 甲基化水平和动态变化进行分析，进一步揭 示山核桃幼胚发育过程中甲基化变化规律，为建立高效的山核桃体细胞胚发生体 系提供理论依据。主要研究结论如下： (1) 本实验对不同时期山核桃幼胚 DNA 甲基化分析的预扩增和选扩增后用 1%的琼脂糖凝胶电泳发现，所有预扩增条带呈弥散分布，表明山核桃幼 胚预扩增的条带片断大小相近，而选择性扩增产物在 100bp-750bp 之间， 并且可以看到不同时期条带的差异性，可以方便筛选选择性扩增引物， 提高实验的效率。 (2) 将 MSAP 条带进行统计分析，在山核桃自然授粉后第 12 周甲基化水平 达到最高为 32.48%，在第 9 周和第 10 周为最低为 26.34%，表明山核桃 幼胚的不同发育时期总 DNA 胞嘧啶甲基化有较大的差异，在发育过程 中呈现一定规律性变化。 (3) 山核桃幼胚不同发育时期，即使甲基化水平一样，甲基化类型也是所不 同，第 9 周和第 10 周甲基化水平相同都为 26.34%，但是第 9 周半甲基 化为 6.91%，全甲基化为 19.43%；而第 10 周半甲基化为 10.48%，全甲 基化情况为 15.86%。半甲基化位点从第 10 周起到第 16 周呈明显下降趋 势，而全甲基化情况，呈明显的上升趋势。 (4) 山核桃幼胚发育的过程中伴随着去甲基化的变化，在第 12 周到第 13 周 去甲基化位点变化最明显，去甲基化位点为 22 个，并且甲基化和去甲 基化情况在幼胚发育的每个时期都存在。 (5) 山核桃不同时期幼胚诱导过程中，胚性感受细胞与不同时期基因组甲基 化水平和类型有密切关系，在胚性感受细胞容易产生的时期，从第 9 周 I 到第 12 周甲基化水平和类型有明显变化，并且在第 13 周甲基化水平和 类型趋于稳定，胚性感受细胞不易产生。胚性感受细胞受到甲基化和去 甲基化共同调控基因表达影响。 (6) 选取山核桃幼胚同一位点甲基化在不同发育时期发生改变的特异性位点 进行片段回收测序，发现回收片段在 100-300bp 之间，进行序列比对得 到了一个 NADP 脱氢酶亚基的同源序列，表明 DNA 甲基化发生对山核 桃胚胎发育正常进行有重要作用。 关键词：山核桃；幼胚；MSAP；胞嘧啶甲基化 II AB ABSTRACT ABSTRACT DNA methylation is one of important epigenetic modification, generally existing in all the genomes of the plant and the animal. DNA methylation has a positive effect on plant，which plays an important role in genetic defense, regulating gene expression and controlling development and growth of plant .DNA methylation is involved with all functions of genome, including transcription, replicat