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I
I
目录
摘要 IX
Abstract XII
第 1 章:绪论 1
1.1 研究背景 1
1.2 研究的目的和意义 3
1.3 研究内容与研究方法 4
第 2 章:破骨细胞的培养及鉴定 6
2.1 引言 6
2.2 材料与方法 6
2.2.1 细胞 6
2.2.2 主要试剂 6
2.2.3 主要仪器 7
2.2.4 实验试剂的配制 7
2.2.5 实验方法 8
2.2.5.1 RAW264.7 细胞的培养 8
2.2.5.2 破骨细胞的诱导培养方法 8
2.2.5.3 抗酒石酸酸性磷酸酶染色 8
2.2.5.4 骨片骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色和扫描电子显微镜检测 8
2.3 实验结果 9
2.3.1 诱导形成的破骨细胞形态学观察 9
2.3.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果 10
2.3.3 骨片骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色结果 10
2.3.4 骨片骨吸收陷窝扫描电子显微镜检测结果 11
II
II
2.4 讨论 11
2.5 结论 13
第 3 章:拉伸应变对破骨细胞凋亡的影响 14
3.1 引言 14
3.2 材料与方法 14
3.2.1 细胞 14
3.2.2 主要试剂 14
3.2.3 主要仪器 15
3.2.4 基底拉伸应变加载装置 15
3.2.5 实验试剂的配制 16
3.2.6 实验方法 17
3.2.6.1 RAW264.7 细胞的培养及破骨细胞的诱导 17
3.2.6.2 破骨细胞不同强度的力学加载 17
3.2.6.3 hoechst33258 染色 17
3.2.6.4 Annexin V/PI 染色,流式细胞仪检测细胞凋亡 17
3.2.6.5 caspase-3 活性检测 17
3.2.6.6 统计学处理 18
3.3 实验结果 18
3.3.1 hoechst 染色 18
3.3.2 Annexin V/PI 染色,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响 19
3.3.3 caspase-3 活性的变化 20
3.4 讨论 20
3.5 结论 23
第 4 章:拉伸应变对破骨细胞凋亡影响的机制研究 24
4.1 引言 24
PAGE
PAGE IV
4.2 材料与方法 24
4.2.1 细胞 24
4.2.2 主要试剂 24
4.2.3 主要仪器 25
4.2.4 实验试剂的配制 26
4.2.5 实验方法 26
4.2.5.1 RAW264.7 细胞的培养及破骨细胞的诱导 26
4.2.5.2 破骨细胞不同强度的力学加载 26
4.2.5.3 线粒体膜电位测量 27
4.2.5.4 western blot 检测破骨细胞 Bcl-2、caspase-3 的表达和细胞 色素 C 的释放 27
4.2.5.5 统计学处理 28
4.3 实验结果 28
4.3.1 线粒体膜电位变化 28
4.3.2 western blot 检测 Bcl-2、caspase-3 的表达和细胞色素 C 的释放
29
4.4 讨论 30
4.5 结论 31
第 5 章:结论与展望 32
5.1 结论 32
5.2 展望 32
参考文献 34
文献综述 41
在学期间取得的成果及发表的代表性论著(全文) 48
在学期间取得的成果 48
代表性论著(全文) 49
作者简历 61
致谢 62
表目录
表 3.1 caspase-3 活性测定反应体系 18
表 3.2 不同强度基底拉伸应变加载后破骨细胞 hoechst 染色得到的破骨细胞凋 亡率 19
图目录
图 1.1 Frost 的力学稳态理论 3
图 1.2 课题实施方案 5
图 2.1 培养 3d 的 RAW264.7 细胞 9
图 2.2 诱导培养 3d 的破骨细胞 9
图 2.3 诱导培养 7d 的破骨细胞 10
图 2.4 TRAP 染色诱导培养 7d 的破骨细胞 10
图 2.5 甲苯胺蓝染色显示破骨细胞形成的骨吸收陷窝 11
图 2.6 扫描电子显微镜观察破骨细胞形成的骨吸收陷窝 11
图 3.1 基底拉伸应变加载装置结构图 16
图 3.2 四点弯曲加载模式图 16
图 3.3 不同强度基底拉伸应变加载后破骨细胞 hoechst 染色 19
图 3.4 不同强度基底拉伸应变加载后 Annexin 结合实验检测破骨细胞凋亡 . 19
图 3.5 不同强度基底拉伸应变加载对破骨细胞 caspase-3 活性的影响 20
图 4.1 不同强度拉伸应变加载后,JC-1 染色法测定线粒体膜电位 29
图 4.2 不同强度拉伸应变加载后,western blot 法检测破骨细胞 Bcl-2、caspase-3
的表
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