沙门氏菌特异性靶点的筛选及荧光定量PCR检测方法的建立-食品科学专业论文.docxVIP

上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 PAGE PAGE vi 沙门氏菌特异性靶点的筛选 及荧光定量 PCR 方法的建立 摘要 本研究利用生物信息学手段，通过比对沙门氏菌及其他原核生物的基因 组序列，发掘出 361 段沙门氏菌特异性片段作为候选分子检测靶点。从这些 序列中随机挑选出 30 个序列片段，设计普通 PCR 引物，并用 58 株沙门氏 菌菌株和 22 株非沙门氏菌菌株对每对引物的检测特异性进行评价，筛选出 15 对特异性较好的引物。经进一步灵敏度评价，得到 6 对检测灵敏度较好 的引物，分别为：c1（36.5 fg/PCR，500 cfu/ mL）；c3（36.5 fg/PCR，500 cfu/ mL）；c20（36.5 fg/PCR，500 cfu/ mL）；c23（36.5 fg/PCR，5×104 cfu/ mL）； c24（36.5 fg/PCR，500 cfu/ mL）和 plc（36.5 fg/PCR，500 cfu/ mL）。用鼠 伤寒沙门氏菌（ATCC 14028）人为污染牛奶样品后，用建立好的普通 PCR 方法进行检测验证，当初始接种菌量为 8 cfu/25g 牛奶时，引物 c3，c20，c24 和 plc 均能在增菌 6-8 小时内检出阳性结果；而严重污染的牛奶样品（104 cfu/25 g 牛奶）则只需增菌 2-4 小时即可检出沙