方法学评价试验——重复性试验TP.pptVIP

电泳法 紫外分光光度法 血清(浆)总蛋白(TP)测定 蛋白质检测方法 此法操作简便、快速（5~10分钟），不消耗样品，测定后仍能回收使用，灵敏高，适用于50~100μg测定。但受蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量的影响，干扰因素也较多（各种嘌呤和嘧啶，各种核苷酸，可校正）。故适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质，不适合血清等组成复杂的蛋白质测定，特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测。 主要有醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电聚焦电泳、双向电泳等。全自动电泳仪在临床的应用也逐渐增多，条带清晰，分辨效果好，能看到蛋白质全貌，但耗时较长，需要特殊仪器。 常用染料有氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼等。 氨基黑、丽春红常作为血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳的染料。 考马斯亮蓝(Bradford)1976年由Bradford建立，该法灵敏度最高（1~5μg），试剂配制简单，检测速度快（5~15分钟）、简便，，干扰因素少(强碱性缓冲液；TritonX100；SDS)，颜色深浅随不同蛋白质变化。适用于要求灵敏度高的微量蛋白质快速定量测定，如尿液、脑脊液等。但有染料粘附比色杯上不易洗脱的缺点。 血清(浆)总蛋白(TP)测定 蛋白质检测方法 邻苯三酚红钼也可用于测定尿液、脑脊液蛋白质含量，既不粘附比色杯 ,又具有高灵敏度，已有用于自动化分析测定尿液蛋白质的试剂盒。 还有测定