分子荧光分析法实验讲义.pptVIP

《仪器分析实验》实验4 分子荧光光谱法测定维生素B2的含量 一、分子荧光分析法简介 (对光的吸收) 1.1 荧光的产生 当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。然而由于分子通过与溶剂分子，同类分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。但当分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级降落至基态的各个不同的振动能级时，则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光即是荧光。 发生激发 态反应 分子内的激发和衰变过程 1.1 荧光的产生 激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率： A1,A2 吸收: 10-15 s VR 振动松弛：? 10-12 s ic 内转化：? 10-11 s isc 系间窜越： 10-6 ~ 10-2 s F 荧光： 10-9 ~ 10-6 s P 磷光： 10-6 ~ 100 s 1.2 荧光光谱 当固定激发光波长和强度不变，而记录荧光强度随波长变化的曲线，称为发射光谱。若固定荧光最强处的荧光波长不变而改变激发光波长，记录荧光强度随激发光波长变化的曲线，称为激发光谱。 激发光谱 发射光谱 1.2 荧光光谱