第六部分：(酶工程)酶、细胞、原生质体固定化.pptVIP

（一）酶的活性 ： 通常低于天然酶（有例外）。 （二）酶的稳定性 酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。 可能的原因： ①固定化增加了酶活性构象的牢固程度， 可防止酶分子伸展变形； ②抑制酶的自身降解。 ③固定化部分阻挡了外界不利因素对酶 的侵袭。 如：氨基酰化酶， 70℃，15分钟，酶失去活性。 而固定化后， 70℃，15分钟，有80%活性。 （三）酶的最适温度 最适温度与酶稳定性有关。 多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也上 升（有例外）。 （四）酶的最适pH a.载体性质的影响 带负电荷载体 ：最适pH 向碱性偏移。 带正电荷载体 ：最适pH 向酸性偏移。 b.产物性质的影响 产物为酸性时，最适pH比游离酶高一些 产物为碱性时，最适pH比游离酶低一些 与自然酶基本相同。但大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。 （五）酶的作用专一性 与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。 （1）细胞的存活率和稳定性提高。 （2）产率增加 。 （3）最适温度和最适pH常保持不变。 二、固定化细胞的性质 乙酰 -DL — 氨基酸 L — 氨基酸 +乙酸 乙酰 -D — 氨基酸 第三节 固定化酶与固定化细胞的应用 一、在工业生产上的应用 1. 氨基酰化酶（Aminoacylase） 世界上第一种工业化生产的固定化酶 酰化酶 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 2.葡萄糖异构酶 世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。 二、固定化酶在医学上的应用 1. 消血栓： 纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。 酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。 用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。 2. 人工肾： 原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。 什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 优点： (1)可提高稳定性。 (2)能回收，易与产物分离，可反复使用。 缺点： (1)存在扩散限制。 (2)酶活性下降。 2. 固定化细胞（immobilized cell） 固定在载体上并在一定空间范围内进行生命活动（生长、繁殖、新陈代谢）的细胞。 优越性： (1)降低成本，省去酶的分离纯化工作; (2)既可作为单一酶，也可作为复合酶系 完成部分代谢过程。 局限性： (1)细胞内多种酶的存在，会形成不需要的 副产物。 (2)只适用于生产胞外酶和其他能分泌到胞 外的产物 (3)细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限 制作用。 3.固定化原生质体 概念：固定在载体上，在一定空间范围内进行生命活动的原生质体。 意义： (1)固定化原生质体去除了细胞壁的扩散障碍，有利于氧的传递，营养成分的吸收和胞内产物的分泌。 (2)原生质体不稳定，容易破裂，固定化后，由于载体的保护作用，稳定性提高。 二、固定化方法 固定化方法 （一）酶的固定化方法 吸附法 共价偶联法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 离子交 换吸附 物理 吸附法 依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用，使酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上。 1.吸附法（adsorption） 根据吸附剂的特点分: 1）物理吸附法（physical adsortion） 作用力：氢键、疏水键 常用载体：活性炭，氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、 多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等。 2）离子结合法（ion binding） 作用力：离子键 常用载体：DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖凝胶、CM- 纤维素 优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联。 2.共价偶联法（covalent binding or covalent coupling） 1）载体： 如:天然高分子衍生物: 纤维素 葡聚糖凝胶 亲和性好，机械性能差 琼脂糖