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液基细胞学标本制片、染色及诊断技术的质量控制 作者：漆明，蒋庆军，韦海春，颜元秀，蒋瑜采 【关键词】细胞学技术组织细胞学制备技术质量控制 近年来随着对提高宫颈癌筛查质量和扩大筛查人群的 关注，细胞学新技术发展迅速，液基细胞学制片技术 (ThinPrepTCT)及TBS [1]诊断报告方式的出现使浸润性 宫颈癌发病率较过去明显降低，但TCT的假阴性、假阳性 诊断仍然客观存在，而搞好质量控制是有效降低TCT假阳 性和假阴性的前提。笔者从标本制片、染色及诊断等方面 介绍如何搞好T CT的质量控制。 1标本制片 标本采集 标本采集的效果明显地影响诊断的准确性，因此标本 采集必须取到足够量的细胞数，并且各类标本中应出现有 效细胞成分。涂片内可供诊断的细胞太少或红细胞太多等 因素均可造成假阴性结果。标本采集应在直观下进行，应 采集到病变部位和宫颈的移行区(鳞柱交界区)细胞，该 区是绝大多数宫颈癌起源的部位。TCT标本取样要保证宫颈 刷的尖端部位有一定的压力，宫颈刷的尖端放入宫颈内， 两边紧贴颈管的外口，以取得足够的细胞成分。涂片中除 鳞状上皮细胞外，必须见到柱状上皮细胞或化生的鳞状上 皮细胞。另外，标本采集时，应尽量避免干扰物（如血 液、黏液等）混入。取材应避开月经期，取材前2 4h不上 药，不冲洗，不过性生活。分泌物较多的时候可在取材前 用棉签轻轻沾去，不可用力擦。 标本制备 T CT制片时细胞标本经程序化处理，使黏液、血细胞 和炎性细胞与上皮细胞分离，制片薄且分布均匀。一般取 材满意的标本均能制出质量较佳的细胞学涂片，但不同原 理TCT制片也各存在某些缺点，如膜式法细胞分布不均， 涂片中某些区域细胞缺如；沉淀法细胞多的标本制片细胞 层次太多，不同一平面上，细胞数量少的标本同样沉淀时 间制片可造成细胞片的数量太少。因此，TCT制片也应根据 所用的原理方法认真控制好容易产生制片质量不佳的情况 标本固定 无论是传统的的巴氏涂片或TCT制片，制片完毕应立即 放入固定液内，使细胞形态保存完好，避免涂片完全干燥 造成细胞褪变，固定不佳会立即引起细胞退化，可导致假 阴性或假阳性。TCT的细胞保存液是一种良好的防腐剂，对 细胞有一定的固定作用，但仍未达到良好的固定效果，在 制成薄层细胞片后，必须用标准浓度的细胞固定液固定。 细胞固定液通常采用9 5%乙醇，乙醇固定液较好的固定浓 度为90 %?95%,低于90 %的乙醇固定效果不好，95%以上 浓度乙醇固定可造成细胞核深染。固定时应淹没整张细胞 片。固定液还必须保持新鲜，使用过的固定液再使用前应 过滤并添加新的固定液，保持其有效浓度。 标本染色 宫颈细胞学的常规染色方法有巴氏染色法和苏木素一 伊红染色法等［2］，较理想的染色方法为巴氏染色及其改 良染色方法。巴氏染色包括细胞核染色分化一返蓝一细胞 质染色-＞透明等步骤，其中最重要的环节是苏木素的细胞 核染色。 染色结果 上皮细胞：核紫蓝色，核仁红色；胞质角化细胞呈粉 红色，全角化呈橙黄色，角化前细胞呈淡蓝色或淡绿色； 白细胞：核蓝紫色，胞质淡蓝或淡绿色；红细胞鲜红色或 橙红色；黏液淡蓝或粉红色。 染色失败的补救 巴氏染色时如遇到染色质量不佳或涂片长期存放而褪 色时，可按以下程序处理后重染：①把涂片浸泡在二甲苯 溶液内，直到盖玻片自动脱落。②把涂片放入二甲苯溶液 内充分浸泡，使树胶完全溶掉。③依次放入无水乙醇和95% 乙醇中，各2?5min。④放入蒸馏水中漂洗，直到胞质颜色 完全脱落干净为止。⑤放入%盐酸中至显微镜下观察细胞核 颜色完全褪掉。⑥水洗1 0?15min，然后重新染色。 2细胞学诊断 TBS诊断术语及划分界限 TCT诊断要求采用TBS （XX版）报告方式及相关术语， TBS报告系统包括对标本的评估、诊断内容、处理的建议三 方面的内容。TBS具体诊断术语包括：正常范围（WNL）、非 典型鳞状上皮细胞（ASC -US）、鳞状上皮内低度病变 （LSIL）、鳞状上皮内高度病变（HSIL）、鳞状细胞癌 （SCC）、非典型腺上皮细胞（AGC）、宫内膜细胞（AG C） 和腺癌（AIS）。 加强制度建设、提高TCT诊断水平和总准确率 总确诊率可反映一个单位团体及其诊断者总的细胞学 诊断水平和准确率［3］，定期对假阳性率和假阴性率进行 分析和比较，不仅可以较多地发现假阳性或假阴性，而且 对于提高细胞诊断医生的水平和发现新问题都有极大的好 处。同时，会诊和借片有利于交流和借鉴。建立涂片档案 和随访档案，涂片明性标本至少要保存1年，阳性标本保 存5年以上。实验室只接收符合要求的取材标本，要认真 查对标本上的病人姓名、床号，查看送检单、检查项目、 送检标本是否符合要求，并按序登记编号，记录接收时间。 明确复诊制度，至少对有问题的或怀疑有问题的涂片进行 复诊，尽可