试验一酶的性质.pdfVIP

实验一 酶的性质 第一部分. 酶的专一性 [原理] 酶具有高度专一性，即对底物有严格的选择性。如唾液淀粉酶能水解淀粉，生成具有还 2+ + 原性的麦芽糖，但不能水解蔗糖。利用水解产物的还原性可使Cu 还原成Cu ，生成Cu O 砖 2 红色沉淀，证明淀粉或蔗糖是否被水解，从而说明酶的专一性。 [操作] 1. 制备稀唾液。 用清水漱口，含蒸馏水少许行咀嚼动作以刺激唾液分泌。取小漏斗1 个，垫小块薄层脱脂棉，直接将唾液吐入漏斗过滤，取滤过的唾液约 1ml，加蒸馏水9ml， 混匀备用。 2. 取小试管3 支，分别按下表编号加入试剂： 试管号 1 2 3 试剂（滴） 0.5%淀粉 16 16 — 0.5%蔗糖液 — — 16 稀唾液 8 — 8 已煮沸的稀唾液 — 8 — 混匀，置于约37℃水浴中保温10 分钟。 3. 另取试管3 支，各加班氏试剂15～20 滴，分别从上表各管中取出溶液2 滴，依次加 入各试管中（滴管每用一次后须洗净再用），在沸水浴上加热3 分钟，冷却后比较各管结果。 [附注] 一般作酶的实验都应以煮沸的酶溶液作对照实验。因为（1）除酶以外，操作过程本身 可能引起底物的转化；（2 ）酶溶液中也可能存在着非蛋白性质的小分子催化物或其它还原性 物质，它们在加热时不被破坏，也可能引起底物转化；（3 ）试剂本身可能为外来物所玷污。 这些因素与酶一同作用。作对照实验能帮助我们肯定在实验中有多少变化是由酶催化的。在 定量实验中，可定量地求出上述非酶性的转化，再从待测管总的转化值中减去这一部分，剩 下的就是由酶催化的部分。 [试剂] 1. 0.5%蔗糖液 2. 0.5%淀粉液（内含0.3%NaCl ） 3. 班氏（Benedict ）定性试剂（参见实验十） 二、温度对酶活性的影响 [原理] 酶促反应在低温时，反应速度较慢甚至停止。随着温度升高，反应速度逐渐加快。当达 到最适温度时，酶促反应速度达最大值。人体内大多数酶的最适温度为37℃至40 ℃。温度 如继续升高，反应速度反而下降。这主要由于酶蛋白因温度升高引起变性而失去活性。 本实验利用碘与淀粉及其水解的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同温度下催化淀粉水 解的速度。 淀粉 糊精 麦芽糖 （与碘呈蓝色） （与碘呈紫色至红色） （与碘不呈色） [操作] 1. 制备稀唾液，同上述实验（酶的专一性）。 2. 取小试管3 支，编号，按下表中滴数依次加入各种试剂。 试管号 1 2 3 试剂（滴） 0.5%淀粉液 10 10 10 pH 6.8 缓冲液 3 3 3 0.85%NaCl 3 3 3 3. 混匀后，分别将1 号、2 号、3