β—内酰胺抗生素 青霉素素G.pptVIP

* * * * * * * * * * * 青霉素G 1、青霉素是β—内酰胺类抗生素中的一类，青霉素G则是目前已知的8种天然青霉素中应用最好的 一种。 2、青霉素G是由产黄青霉产生的一种天然产物。 侧链酰基 母核 4、青霉素G及其盐类主要用于敏感菌引起的各种急性感染，如肺炎、支气管炎、脑膜炎等。 3、青霉素G的作用机制是抑制细胞壁的合成。 长效西林 盘尼西林 菌种选育 发酵工艺 分离工艺 精制提纯 最早使用的是点青霉菌，现在使用的是产黄青霉菌。 按菌丝形态分为丝状菌和球状菌，国内采用的大都是绿色丝状菌。 菌种的选育有自然选育和诱变育种两种方法。 利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理，通过分离，筛选排除衰退型菌株，选择维持原有生产水平的菌株的纯种选育的方法。 自然选育 发展方向 菌种选育 自然选育 优点：简单易行 缺点：效率低、进展慢难以获得高产突变株 诱变育种 以人工诱变手段诱发微生物基因突变，改变遗传结构和功能，通过筛选，从变异体中找出产量高、性状优良的突变株，并找出其最佳培养基和最佳培养条件，使其在最适的环境条件下合成有效产物。 诱变育种 菌种选育 优点：速度快、收效大、方法简单是当前的一种主要方法。 诱变育种步骤： 1、出发菌株的选择 2、处理菌悬液的制备 3、诱变处理 4、中间培养 5、分离和筛选 发酵工艺 分离工艺 精制提纯 发展方向 发酵工艺 工艺流程图 冷冻干燥孢子 孢子培养 种子培养 发酵培养 补料 消泡剂 灭菌空气 过滤 提取 发酵工艺 孢子制备 沙土管 斜面母瓶 种子罐 大米孢子 条件控制：水分含量在10%以下，4℃冰箱保存 25℃，6—7天 25℃， 6—7天 孢子培养 孢子培养 发酵工艺 种子培养 种子罐 繁殖罐 发酵罐 一级种子培养 二级种子培养 27℃，40—50h 25℃，10—14h 种子质量要求：产生大量健壮的菌丝体，处于第3、4期 发酵工艺 发酵培养基 1、碳源：提供能量 如乳糖、蔗糖、葡萄糖等 目前生产上采用流加葡萄糖母液和工业用葡萄糖 2、氮源：提供蛋白质合成原料 目前生产上用的氮源是花生饼粉、麸质水和玉米粉等。后期不加无机氮源硫酸铵氨水等 发酵工艺 发酵培养基 3、无机盐： 硫和磷：硫浓度降低时青霉素产量减少三倍，磷浓度降低时青霉素产量减少一倍。 钙、镁、钾 铁离子：铁容易渗入菌丝内，它对青霉素发酵有毒害作用 发酵工艺 条件控制 1、pH控制 青霉素合成的适宜pH是6.5—6.9之间，避免超过7.0。 pH降低可以通过补加氨水、碳酸钙、尿素调节 pH上升，通过加糖或硫酸调节。 2、温度控制 产黄青霉菌的生长适宜温度是26℃—27℃，分泌青霉素的温度是20℃。因此在生产中采用变温控制，不同阶段温度不同。前期控制在25℃—26℃，后期降温控制在22℃。 发酵工艺 条件控制 3、溶氧的控制 溶氧＜30%饱和度，产率急剧下降，低于10%时，会造成不可逆的损害。 通气比一般在1:0.8—1.2vvm。适宜搅拌速度在150—200r/min。 4、泡沫与消沫 用油或化学合成消沫剂。 发酵工艺 发酵方式 发酵检测 半连续发酵 可以延长青霉素的合成期，提高产量。 青霉素的发酵过程控制十分精细，一般2小时取样一次，测定发酵液的pH、菌浓、残糖等，发现染菌立即结束发酵，视情况放过滤提取。因为染菌后的pH值波动大，青霉素在几个小时内就会被全部破坏。 菌种选育 分离工艺 精制提纯 发展方向 分离工艺 发酵液预处理 加入草酸或磷酸酸化，酸化时pH控制在4—5，再加些去乳化剂如十五烷基溴化吡啶等。 过滤 目前采用的是转鼓式过滤、板框过滤，加助滤剂。 随着高效高速萃取离心机的出现，可去掉过滤工序，直接萃取，比板框滤机除去菌丝后再提取的收率高出2—3%。 分离工艺 萃取 萃取剂的选取原则： 对青霉素的分配系数高的有机溶剂 在水中的溶解度小 不能和底物反应 价格便宜，来源广 可以看出：工业上通常采用醋酸丁酯和戊酯。萃取二到三次。 分离工艺 萃取 条件控制： 发酵滤液与乙酸丁酯的体积比为1.5—2.1:1，即一次浓缩倍数为1.5— 2.1. 从乙酸丁酯反萃到水相时，PH选择6.8—7.4.为避免pH波动。采用硫酸盐、碳酸盐缓冲液进行反萃。水相与溶剂比例为1:3—4. 几次萃取后，浓缩十倍，接近结晶要求 菌种选育 发酵工艺 精制纯化 发展方向 精制纯化 结晶液 工艺流程 青霉素钾盐湿晶体 KAC-C2H5OH溶液， 0—20℃，搅拌2分钟 洗涤后湿晶体 静止30分钟后甩虑， 丁醇洗两次，乙酸乙酯顶洗 过筛后颗粒 颗粒机做颗粒过筛 干粉 90—95℃热水，740m