抗肿瘤药物筛选课件.pptVIP

五 动物模型 整体动物实验法是评价一个药物是否有效的最主要方法 整体动物在肿瘤药理学研究中的作用： 1.研究新开发药物对肿瘤的防治作用； 2.抗肿瘤药物筛选及抗肿瘤机理探索； 3.探索药物和目前常规肿瘤治疗方法的 综合应用以提高疗效。  常用宿主动物： 裸小鼠 （“活的试管”） 特点：先天无毛，无胸腺，T淋巴细胞功能 完全缺失，对异种移植不产生排斥反应。 缺点：费用高，饲养条件高，不宜大量繁殖。 一般不用于初筛。 应用：观察药物对癌细胞逆转作用， 抑制增殖及诱导凋亡作用。 C57BL/6小鼠 特点：黑毛，体型小，性情温顺， 易饲养，药敏性好，为研究 Lewis肺癌首选。 应用：药物体内初筛。 模型建立方法 实体瘤建立 1.小块瘤体接种法 2.肿瘤细胞悬液接种法 3.培养细胞移植法 治疗方案：接种后生长至可触及即可治疗，依药物特性及研究目的确定方案，可给药一次，或连续几次，或一周几次连续几周。 疗效评价： 肿瘤抑制率＝（对照组瘤重－给药组瘤重）/对照组瘤重×100％ 腹水瘤建立及评价： 评价：对照组通常2-3周内死亡，治疗组一般观察50d左右，计算生命延长率。 生命延长率＝（治疗组平均存活天数－对照组平均存活天数）/对照组平均存活天数×100％ 注意事项： 1.取材时取实质部位，不要取坏死、液化部位，防止污染。 2.试验前先饲养裸鼠一周，以适应新环境，若死亡超过10%不可用，一般18-22g，4-6周龄。 3.饲养环境及鼠笼、垫料、饲料严格消毒 4.保持恒温，一般25±1℃，湿度40-60%，每天10h光照、14h黑暗。 1 3 5 7 9 11 13 15 days Tumor Valume (mm3) A C a b c d B a b 六 基因芯片技术 1.原理 是一种建立在杂交测序基本理论上的全新技术，它利用固定在芯片上的几万至几十万条探针与样品进行杂交，在一步实验中获取大量的信息。 ⑤刺激前后的mRNA的制备及标记 ⑥芯片杂交及扫描 ⑦数据分析及生物信息学分析 　　用表达谱数据库及配套软件分析受药物诱导的基因，针对这些基因的功能确定药物的疗效。 基因芯片技术总流程图 * * 鸡属卵生动物,胚胎在卵中发育。当卵子由葡萄状的卵巢排出时，正处于减数第二次分裂的中期阶段。然后卵子进入输卵管并下移，如果遇到精子，受到精子入卵的影响，即完成第二次减数分裂，放出第二极体并完成受精，所形成的合子在输卵管中还要经过２４－２７小时的发育。在如此长的时间内，合子已发育到了囊胚阶段甚至原肠胚早期阶段。此时的白色圆盘较大叫做胚盘。在进行上述发育过程的同时，鸡卵由输卵管前部逐渐后移，包上由输卵管分泌蛋白形成的卵白和壳膜，并在子宫内包上钙质壳后排到体外以实验部位边缘1 mm范围内为一级血管,实验部位边缘5 mm处为二级血管,对新生血管进行计数比较可用于促血管新生药物的评价和筛选。 鸡胚有4层胚膜(卵黄囊膜、羊膜、浆膜、尿囊膜)和2套血管网(卵黄囊血管网、尿囊膜浆膜血管网)。鸡胚尿囊出现在孵育的第3．5d，在孵育4～10d．尿囊腔迅速增大至胚外体腔并包围羊膜．以后尿囊外壁与绒毛膜紧贴形成尿囊绒毛膜 中胚层的双层结构由绒毛膜和尿囊膜组成．在这两层中形成丰富的血管网。不成熟的血管散在分布于中胚层．直到第8d形成毛细血管丛．覆盖在绒毛上皮细胞表面。毛细血管快速增殖持续到第11d．此后内皮细胞有丝分裂指数迅速下降．到第18d，血管系统最终形成。鸡胚孵化至第8d时．胚膜和血管网的发育已趋稳定，而机体免疫系统尚未完全建立．此时对各种异物几乎不产生排斥反应．便于观察各种诱导剂和抑制剂对血管生成的影响。 早期鸡胚的血液循环有3条主要路线，即卵黄囊血液循环、尿囊绒毛膜血液循环和胚内循环 。 * * 抗肿瘤药物筛选 侯桂琴 郑州大学药学院 内容提要 一 细胞筛选 二 微生物学筛选方法 三 精原细胞法 四 利用分子靶点筛选 五 动物模型 六 基因芯片技术 一 细胞筛选 筛选方法 1.四氮唑蓝（MTT）还原法 原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值