蛋白质一级结构4学时.pptVIP

3.2.4 肽链的部分裂解 1）化学裂解法 溴化氰（CNBr）：···－Met－CO↓NH－CH（R）－ ··· 羟胺（NH2OH）：Asn ↓ Gly; Asn ↓Leu; Asn ↓Ala 2) 酶裂解法 胰蛋白酶（trypsin） 糜蛋白酶(chymotrypsin) 嗜热菌蛋白酶(thermolysin) 胃蛋白酶(pepsin) 肽链的部分裂解－酶法 3.2.5 肽段氨基酸序列的测定 1) Edman降解法 2）酶解解法 3）质谱法 4）根据核苷酸序列的推定法 3.2.6 肽段在多肽链中次序的确定－重叠肽法 例如：10个氨基酸残基的肽链用A/B两种方法的到两套肽段 方法A 方法B N-末端残基A，C-末端残基S 1、AF AFGR 2、GRLY LYKW 3、KW WHS 4、HS 10肽的顺序：AFGRLYKWHS 3.2.7 二硫键位置的确定－对角线电泳 ①用胃蛋白酶水解多肽链，把水解后的混合肽段点到滤纸的中央，在pH6.5的条件下，进行第一向电泳，肽段将按其大小及电荷 的不同分离开来。 ②把滤低暴露在过甲酸蒸气中，使-S-S断裂，含二硫键的肽被氧化成一对含磺基丙氨酸的肽。 ③滤纸旋转900解在与第一向完全相同的条件下进行第二向电泳。 肽斑用茚三酮显色确定，大多数肽段迁移率不变，并位于滤纸的一条对角线上，只有磺基丙氨酸的肽段偏离了对解线。 ④将每对含磺基丙氨酸的肽段取下，进行氨基酸序列分析，然后与多肽链的氨基酸序列比较，即可确定二硫键的位置。 对角线电泳图示 3.3 蛋白质序列数据库（database or databank ） 著名的数据库： 美国国家生物医学基金会主持的PIR（Protein Information Resource,蛋白质信息库；或Protein Identification Resource,蛋白质鉴定库） 美国政府支持的Gen Bank(Gene Sequence Data Bank,基因序列数据库) 欧洲的EMBL（European Molecular Biology Laboratory Data Bank,欧洲分子生物学实验室数据库） 4 蛋白质的一级结构与功能的关系 4.1同源蛋白质的物种差异与生物进化 4.2蛋白质的激活 4.3 分子病 一级结构似，蛋白质空间构象和功能也相似，例如：不同哺乳类动物的胰岛素分子。 一级结构不同，蛋白质功能不同。 4.1同源蛋白质的物种差异与生物进化 1）同源蛋白质 2）细胞色素C 3）系统树（进化树）：物种之间进化关系的图解 几个名词 同源蛋白质：在不同生物中行使相同或相似功能的蛋白质, 同源蛋白质一般具有几乎相同长度的多肽链。 同源蛋白质的氨基酸序列具有明显的相似性，这种相似性称为序列同源（sequence homology）。 同源蛋白质的氨基酸序列中有许多位置的氨基酸残基对所有已研究过的物种来说都是相同的，这样的aa残基称为不变残基（invariant residue），对生物功能起决定作用； 但其他位置的氨基酸残基对不同物种有相当大的变化，这样的残基称为可变残基（variable resdue），残基的变化不影响蛋白质的功能，并且能提供物种之间亲缘关系远近的信息。 2）细胞色素C 细胞色素c是广泛存在于生物体的一类同源蛋白，一条肽链含有血红素辅基。 物种间亲缘关系越近，细胞色素c的一级结构相似，其空间结构和功能也相似。 细胞色素c的作用是在生物体内传递电子。 细胞色素c的氨基酸残基有一部分在不同的生物属间有差异。 不同物种间细胞色素C序列间氨基酸差异数目的比较 3）系统树 系统树 4.2蛋白质的激活 1）血液的凝固 2）胰岛素的形成 凝血酶原→凝血酶 凝血酶作用—使血纤蛋白原裂解 血液凝固的激活过程 2）胰岛素分泌：前胰岛素原→胰岛素原→胰岛素 3）分子病 *对于维持蛋白质功能区的特定构象，一级结构中某些氨基酸残基是必需的，如果这些氨基酸残基发生改变，蛋白质的特定构象必将被破坏，蛋白质的生物学活性丧失。 *由于蛋白质分子发生变异所导致的疾病称为分子病。 其根本原因是基因发生变异。 注意 *并非一级结构中所有的氨基酸都很重要。 *有时蛋白质中某个或某几个氨基酸残基改变，并不影响蛋白质的功能。 *有些蛋白质的功能发挥仅与其某部位的特定构象有关。通常称这些特定部位为功能区。 *只要蛋白质的功能区结构完好，蛋白质的其它部位发生改变，不影响蛋白质的功能。 蛋白质的结构（structu