蛋白质药物的分析.pptVIP

* 标准曲线的绘制 精密吸取1.2，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml色氨酸对照品溶液，置100 ml量瓶中，用氢氧化钠液稀释至刻度，在280，303.2nm处分别测定，计算吸收度差值△A 。 在0.5～3.0mg/100ml范围，浓度与吸收度差值呈良好性关系。 * （七）、导数分光光度法 选定导数光谱波长范围为322～270nm，按导数分光光度法测定色氨酸、酪氨酸的一阶，二阶和三阶导数光谱。 在三阶导数光谱中色氨酸在287、284、280nm有三个导数光谱峰，而酪氨酸在零线上，选定三阶导数分光光度法。 * 标准曲线绘制 对照品色氨酸的0.1mol/L氢氧化钠液以导数分光光度法测定三阶导数。 在一定浓度范围内、在280nm波长处，振幅值D与浓度呈良好的线性关系。 色氨酸浓度与振幅值D280的关系 Y=0.46247x+0.05，r=0.9999 高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC） * 实例：L-精氨酸—高氯酸滴定法 取本品约0.1g，精密称定，置50ml烧杯中，加冰醋酸10ml与醋酸汞试液5ml，缓缓加热溶解。 放冷后，用高氯酸液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 每1ml的高氯酸液相当于10.53mg的C6H14N4O2·HCl。 * 第十章 氨基酸与蛋白质类药物的分析 第一节 概述 第二节 氨基酸类药物的分析 第三节 蛋白质类药物的分析 * 第一节 概述 一、氨基酸的性质 二、蛋白质的性质 * 一、氨基酸的性质 具有旋光性 光吸收：酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，在近紫外区有最大吸收。 酸碱性：两性电解质，净电荷为零时的pH称为等电点（pI ）， 生理条件下多数以负离子形式存在 pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 CH R COOH NH3+ CH R COO NH2 CH R COO NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- (pK′1) (pK′2) 当氨基酸溶液在某一定pH值时，使某特定氨基酸分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该氨基酸的等电点(isoelectric point，pI)。 1.两性解离和等电点 一、氨基酸的性质 TrpTyrPhe的 紫外吸收光谱 摩尔吸收系数 波长 2.光学性质 a. 与茚三酮反应:用于氨基酸定量定性测定. b.与2,4一二硝基氟苯(DNFB)反应(sanger反应):用于蛋白质N-端测定。 c. 与苯异硫氰酯（PITC）反应(Edman反应)，用于蛋白N-端测定，蛋白质顺序测定仪设计原理依据。 3.重要化学反应 氨基酸与茚三酮反应 + 3H20 水合茚三酮(无色) NH3 CO2 RCHO + 还原性茚三酮 紫色化合物 (弱酸) 加热 水合茚三酮 + 2NH3 + 还原性茚三酮 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应） DNFB（dinitrofiuorobenzene） DNP-AA(黄色) + + HF 弱硷中 氨基酸 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） PITC（phenylisothiocyanate） + 苯乙内酰硫脲衍生物(PTH-AA) （phenylisothiohydantion-AA） 弱硷中 (400 C) (硝基甲烷 400 C) H+ 二、蛋白质的性质 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 2.1蛋白质为什么能作为药物? 1）作为生物催化剂（酶） 2）代谢调节作用(胰岛素调节血糖) 3）免疫保护作用(白介素和干扰素) 4）物质的转运和存储 5）运动与支持作用 6）参与细胞间信息传递 2.2 蛋白质元素组成的特点： 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％。 100克样品中蛋白质的含量 ( g % )= 每克样品含氮克数× 6.25×100 2.3 蛋白质的基本单位-氨基酸 氨基酸的分类： 非极性側链氨基酸 非电离极性側链氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸 * 2.4 蛋白质的性质 高分子有机物 蛋白质胶体性质 两性解离性质及等电点 蛋白质的紫外吸收特性 蛋白质呈色反应 * 蛋白质为高分子有机物 蛋白质水溶液具有亲水胶体的性质，还具有扩散和沉降作用，粘度大和不透过半透膜等。 沉降常数（S）： 扩散常数（D）： 粘度：在一定溶质浓度下，取决于溶质的分子量和形状。 * 蛋白质为两性电解质 蛋白质分子至少具