溶血与荧光-公开课件.pptVIP

实验七 免疫荧光技术及其应用 实验目的 1 归纳免疫荧光技术的原理，描述免疫荧光的实验操作步骤。 2 归纳免疫荧光技术的特点及应用。 二、实验原理 免疫标记技术（immunolabelling technique）: 是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。 免疫荧光技术 1 荧光色素与抗体或抗原牢固结合，但不影响该抗体或抗原的免疫特性。 2 荧光标记的抗原抗体复合物经激发后产生荧光，可检测和定位未知的抗原或分析抗体的产生。 免疫荧光的种类 检测小鼠脾脏当中的T细胞数 T细胞表面标记 检测小鼠脾脏当中的T细胞数 实验材料 小鼠脾脏（四人一只） 剪刀、镊子 载玻片每组二张 兔抗鼠 CD3一抗 FITC标记的羊抗兔二抗 荧光显微镜及荧光灯源。 实验步骤 1 ．印片：小鼠取出脾脏，以小剪刀剪开，吸干创面血液，用创面轻压玻片，使之粘上1～2层细胞，然后晾干。 2．标本的固定：预冷的丙酮室温10min，标本片固定后立刻用冷PH7.4，0.01M PBS冲洗，取出后空气干燥 实验步骤 3．荧光抗体染色法： 兔抗鼠CD3一抗 PBS PBS 37度湿盒中温育1小时，PBS浸洗三边，每次三分钟 实验步骤 （2）加荧光标记二抗： PI +FITC标记的羊抗兔二抗 PI 然后在湿盒中37℃保温30min，同上法洗涤。 4 荧光显微镜下观察 * TCR识别结合MHC分子的抗原 CD3参与受体的装配及信号传递 *