研究与分析宫颈癌RASSF2A基因启动子甲基化及临床意义.doc

研究与分析宫颈癌RASSF2A基因启动子甲基化及临床意义 谢景(贵阳护理职业学院医学基础部 贵州 贵阳550081) 【 】目的：检测与分析宫颈癌组织中Ras相关区域家族2A基因启动子 甲基化状态，同时分析Ras相关区域家族基因甲基化特点及其与临床病理关系。 方法：选取木院所收治的92例宫颈癌患者和76例宫颈上皮内瘤变患者及50例 正常宫颈组织人群进行研究，并采用甲基化特异性PCR对研究对象的Ras相关区 域家族基因启动子甲基化状态进行检测。结果：经检测和统计分析，宫颈癌组织 中Ras相关区域家族基因甲基化率明显高于正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤变 (Plt;0.05)o Ras相关区域家族甲基化阳性率与淋巴结转移呈正相关性(Plt;0.05)。 Ras相关区域家族甲基化与年龄、组织分级、临床分期、病理类型无相关性 (Pgt;0.05)o结论：临床上，Ras相关区域家族基因启动子甲基化为常见情况， 同时其可能与临床宫颈癌发牛及淋巴结转移存在紧密联系，进而临床宫颈癌分子 诊断及预后判断提供重要参考价值。 【关键词】Ras相关区域家族；甲基化；宫颈癌 【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752 (2015) 08-0103-02 宫颈癌是临床妇科中常见恶性肿瘤疾病，对女性人群牛命健康造成极大威胁, 且其发病率及死亡率呈逐年上升趋势。目前全球大约新发患者为50万，大约80% 发牛于发展中国家［1］。宫颈癌发病的主要原因为人乳头状瘤病毒(HPV)感染，然 大约90%宫颈鳞癌及50%宫颈腺癌患者可检测到HPVDNA,因此宫颈癌为目前恶 性肿瘤疾病中唯一明确病因的疾病［2］。但HPV感染为宫颈病变或宫颈癌必要条 件，经流行学调查发现，感染HPV感染妇女中，少数患者发展为宫颈癌，因此 而说明还存在其他因素参与宫颈癌恶性转化过程。近年来，随着临床研究不断深 入，遗传学在肿瘤发生中的作用逐渐得到人们所重视。RSA蛋白通过相关重要信 号传导途径来有效调节细胞分化和增殖及凋亡等。经研究发现⑶，RSA信号通路 改变可导致肿瘤发生，RAS相关区域家族2A基因(RAS association domain family2A,RASSF2A)是一个潜在抑癌基因，其表达缺失或减弱已于胃癌和结肠癌及 胰腺癌等肿瘤中发现。但目前对RASSF2A基因表达及其启动子甲基化状态与宫颈 癌关系的研究较少，本次对宫颈癌组织中RASSF2A基因启动子甲基化状态采用甲 基化特异性PCR(MSP)法进行检测，并分析其与临床病理特征间关系，探讨 RASSF2A基因启动子甲基化在宫颈癌中发生及发展的作用及临床意义，报道如下。 1 ?资料与方法 1.1 一般资料 选取贵阳市妇幼保健院妇科2011年6月?2014年10月期间所收治的92例 宫颈癌患者和76例宫颈上皮内瘤变患者及50例正常宫颈组织人群进行研究。其 中宫颈癌患者中,年龄28?67岁,平均(45?5plusmn;l?5)岁；临床分期：IA2期 20例、IB1+IB2期56例、IIA期16例；病理分级：腺癌16例、鳞癌76例；淋巴 结转移者20例、无淋巴结转移者72例；术前患者均未采取放化疗治疗。宫颈上 皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasis, CIN)患者:CIN I 为 28 例、CIN II?III 为48例；年龄23?68岁，平均为(47.0plusmn;1.0)岁。正常宫颈组织取自全子 宫切除术患者中，年龄26?65岁，平均为(46?5plusmn;l?0)岁。本次所研究标 本均经病理证实，标本收集后放置于?80°C冰箱中保存。 1.2方法 使用试剂：组织基因组DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技公司。DNA 甲基化试剂盒购自Zymo research公司，纯化试剂盒购自Promega公司；引物均 由上海生工生物工程技术公司合成。 检测方法：将冻存组织剪碎、研磨，按照DNA提取试剂盒说明书提取基因 组DNA,然后测定其纯度及浓度。基因组DNA采用亚硫酸钠处理，取1 ug DNA 溶于50ul水中，并加入3mol/L氢氧化钠溶液3.3ul,于37°C中孵育15min[4]o 加10mmol/L氢醍30ul、亚硫酸氢钠3mol/L520ul,混匀，放置于50°C水浴中16ho 经碱基修饰的DNA采用Wizard DNA Clean-Up System进行脫盐和纯化，然后再冋 收。冋收后的DNA溶于20 ul TE缓冲液中，并放置于?80°C冰箱中保存备用。 甲基特异性聚合酶链反应：经修饰的DNA采用MSP试剂盒按使用说明书进 行操作。甲基特异性引物：5’ -GT-TCGTCGTCGTTTTTTAGGCG-3z和5’ -AAAAACCAACGAC-CCCC