1细胞工程简介.ppt

青霉属 （Penicillium ）是一类真菌的总称。 半知菌类，串珠霉目的一属。 菌丝为多细胞分枝。无性繁殖时，菌丝发生直立的多细胞分生孢子梗。每枝顶端有2-3个瓶状细胞，其上各生一串灰绿色分生孢子。 常见于腐烂的水果、蔬菜、肉食及衣履上，多呈灰绿色。 有些种类如点青霉（P.notatum）和黄青霉（P.chrysogenum）等可提取青霉素。灰黄青霉（P.griseofulvum）等可提取灰黄霉素。 1980年，由美国生物化学家博耶和科恩创建的基因工程公司，通过各种不同基因组合得到几株生产干扰素的细菌。1～2天内每个菌体能产生20万个干扰素分子。 爱尔兰先灵葆雅公司生产的干扰素α-2b，1.2mL含1800万IU，每支1235元(90个菌/1-2天) ，每个细菌1天产值6.86元，计算公司产值和利润？ * Cell engineering * （2）天然培养液 直接从动物体采取血液或组织液一定成分作为培养液，天然培养液营养成分丰富，但成分复杂，来源有限。 a.血清 能供给细胞营养成分，促进细胞合成DNA，促进细胞增殖。是最常用、最有效的天然培养液，含有许多不可缺少的未知成分。常用犊牛血清、胎牛血清等，来源困难，价格昂贵。 b.胶原 从动物真皮中提取，它是细胞生长的良好基质，促进组织细胞的贴壁，改善生长表面特性。常用大鼠尾巴的筋腱、牛真皮等。 * Cell engineering * （3）合成培养液 人工模拟体内相似的生长环境而配制。 a. 含血清培养液 加入一定量的血清，以克服合成培养基的不足。常用的有：M199（Morgen 1952年研制的）、DMEM (Dulbecco modified Eagle medium)、F-10(Ham 1962年针对小鼠细胞培养用)、RPMI1640(MOOR等研制的适合多种细胞生长的应用最广泛的培养基之一)。 b. 无血清培养液 血清对细胞生长有效但其成分复杂，特别是易带入动物疾病。为了深入研究细胞生长发育、分裂及衰老的生物学机制，人们研制了无血清培养基。 * Cell engineering * 3）其它常用溶液 消化液 在细胞培养前，把组织块解离成单个细胞或传代培养时，使细胞脱离贴壁器皿的表面并分散解离的溶液。 常用有3种： 胰蛋白酶液 来自动物胰脏黄白色粉末。常用0.25%和0.125%，温度37℃、pH7.4左右。Ca 2+能干扰胰酶的活性，加少量含钙的血清可终止酶的消化作用。 * Cell engineering * 胰蛋白酶(简称胰酶)是广泛应用的消化剂。主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质的蛋白质水解而使细胞分散开。 常用的市售胰蛋白酶活力为1：125或1：250（也就是说，1份胰蛋白酶可解离125份、或250份酪蛋白），在37℃、pH8.0时活力最强。实际应用中，可根据组织的疏松和结构不同，采用冷消化（4℃）或热消化（室温、37℃）。 * Cell engineering * EDTA溶液 是一种化学螯合剂，与细胞环境中Ca 2+、Mg 2+等形成螯合物，破坏组织完整性，从而使细胞分离。与胰蛋白酶合用可提高消化效率。常用D-Hank配成0.2%的EDTA使用。 胶原蛋白酶液 主要水解细胞间质的脯氨氨酸多肽，使细胞离散，对细胞损伤弱。消化后要充分漂洗去除，一般用于特殊种类的细胞消化（常用于消化上皮细胞）。 * Cell engineering * 抗菌素液 抑制培养液中可能出现的细菌和真菌的污染。常用终浓度为100u/mL的青、链霉素；50μg/mL的卡那霉素；25u/mL的制菌霉素。 谷氨酰胺溶液 谷氨酰胺易被破坏而失效，一般添加至200mmol/L谷氨酰胺溶液。肿瘤细胞比正常细胞对谷氨酰胺需求量高1倍。 * 植物细胞培养 * 3.植物细胞培养基 培养基（medium）的主要成分 无机盐和水 大量元素 C.H.O.N.P.K.Ca.Mg.S.Cl 微量元素 Fe.Cu.Mo.Zn.Mn.Co.B.Na 水 蒸馏水、双蒸水或使用去离子水 有机化合物 糖 碳源和能源 氨基酸类 有机氮源 维生素类 VB1、VB6、生物素、烟酸、叶酸等 生长调节物 生长素 IAA、NAA、2,4-D、IBA 分裂素 天然： 6-BA、KT（激动素，糠基酰嘌呤） 人工：ZT（玉米素）、2-iP 赤霉素 GA3 琼脂 从海藻中提取的一种高分子碳水化合物 * 植物细胞培养 * 生长调节剂的特点 * 植物细胞培养 * 生长素和分裂素添加原则 生长素和