基因工程及其应用(公开课)课件.pptVIP

作为运载体必须具备哪些条件？ 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2、质粒的存在对宿主细胞无影响； 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 质粒可作为有何特点？ 二、基因操作的工具 。 从细胞中分离出DNA 从大肠杆菌中提取质粒 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 三、基因操作的基本步骤 。 三、基因操作的基本步骤 。 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 三、基因操作的基本步骤 。 目的基因的提取方法 直接分离基因： 人工合成基因： 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA 鸟枪法 三、基因操作的基本步骤 。 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 　　将供体细胞中的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到不同的受体细胞中去，让这些DNA片段在受体细胞中扩增。从中找出含有目的基因细胞，并将含有目的基因的DNA片段分离出来。　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大。一般不适用于真核细胞的基因。 三、基因操作的基本步骤 。 ⑵人工合成基因法 DNA合成仪 ②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 ①反转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 三、基因操作的基本步骤 。 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 目的基因与运载体结合 目的基因与运载体结合的结果有三种可能： a、目的基因与目的基因结合， b、质粒与质粒结合， c、目的基因与质粒结合。 所以需要筛选。 作用：将外源基因送入受体细胞 三、基因操作的基本步骤 。 常用的受体细胞： 目的基因导入受体细胞 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 主要借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 导入方式： 三、基因操作的基本步骤 。 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 导入过程：运载体为质粒，受体细胞为细菌 三、基因操作的基本步骤 。 大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 目的基因的检测和表达 检测：通过检测标记基因的有无，来判断目的基因是否导入。 表达：通过特定性状的产生与否来确定目的基因是否表达。 三、基因操作的基本步骤 。 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 三、基因操作的基本步骤 。 1、基因工程与作物育种 转入苏云金杆菌的一个抗虫基因， 是中国目前最主要的转基因作物 转基因抗虫棉花 四、基因工程的应用 。 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯 不会引起过敏的转基因大豆 四、基因工程的应用 。 运用基因工程技术，不但可以培养优质、高产、抗性好的农作物及畜、禽新品种，还可以培养出具有特殊用途的动、植物。 四、基因工程的应用 生长快、耐不良环境、 肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的 转基因牛(阿根廷) 。 导入贮藏蛋白基因的超级羊和超级小鼠 导入人基因具特殊用途的猪和小鼠 超级动物 特殊动物 四、基因工程的应用 。 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 ⑴ 基因工程药品的生产 许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。 2、基因工程在医学上的应用 四、基因工程的应用 。 胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 　将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！使其价格降低了